| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 引言 | 第12-21页 |
| 0.1 概述 | 第12-13页 |
| 0.2 阿尔兹海默病 | 第13页 |
| 0.3 内质网应激 | 第13-16页 |
| 0.3.1 UPR信号转导通路 | 第14-15页 |
| 0.3.2 ERS与caspase | 第15-16页 |
| 0.3.3 ERS与氧化应激 | 第16页 |
| 0.4 DHCR24 | 第16-19页 |
| 0.4.1 DHCR24的结构及分布 | 第16-17页 |
| 0.4.2 DHCR24通过合成胆刊醇发挥神经保护作用 | 第17-18页 |
| 0.4.3 DHCR24作为ROS清除剂发挥抗氧化抗内质网应激作用 | 第18页 |
| 0.4.4 DHCR24作为caspase 3的底物通过抑制其活性来发挥抗细胞凋亡作用 | 第18-19页 |
| 0.5 腺病毒载体 | 第19-20页 |
| 0.6 研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 第1章 DHCR24保护N2A细胞对抗ERS的研究 | 第21-35页 |
| 1.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 1.2 试剂配制 | 第23页 |
| 1.2.1 PBS的配制(2L) | 第23页 |
| 1.2.2 细胞冻存液的配制 | 第23页 |
| 1.2.3 胰酶的稀释 | 第23页 |
| 1.2.4 细胞培养基的配制 | 第23页 |
| 1.3 实验方法 | 第23-30页 |
| 1.3.1 N2A细胞复苏、传代及冻存 | 第23-25页 |
| 1.3.2 N2A细胞计数 | 第25-26页 |
| 1.3.3 对N2A细胞进行腺病毒转染 | 第26-27页 |
| 1.3.4 免疫荧光法检测腺病毒转染效率 | 第27-28页 |
| 1.3.5 衣霉素处理细胞 | 第28-29页 |
| 1.3.6 TUNEL法检测细胞凋亡 | 第29页 |
| 1.3.7 免疫荧光法检测ERS条件下caspase 3及caspase 12的活性 | 第29-30页 |
| 1.4 实验结果与讨论 | 第30-34页 |
| 1.4.1 重组腺病毒介导的DHCR24过表达保护N2A细胞免于由ERS引起的细胞凋亡 | 第30-32页 |
| 1.4.2 DHCR24的过表达抑制细胞凋亡信号转导通路 | 第32-34页 |
| 1.5 结论 | 第34-35页 |
| 第2章 DHCR24抗内网应激信号转导通路的研究 | 第35-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 2.2 试剂配制 | 第36-38页 |
| 2.3 实验方法 | 第38-42页 |
| 2.3.1 抽提蛋白 | 第38页 |
| 2.3.2 制作蛋白标准曲线及测定蛋白浓度 | 第38-39页 |
| 2.3.3 蛋白免疫印迹(Western Blotting) | 第39-42页 |
| 2.3.4 免疫荧光法检测CHOP蛋白的表达 | 第42页 |
| 2.4 实验结果 | 第42-46页 |
| 2.4.1 DHCR24过表达条件下TM诱导N2A细胞中内质网应激的产生 | 第42-45页 |
| 2.4.2 DHCR24过表达对内质网应激信号转导通路的影响 | 第45-46页 |
| 2.5 结论 | 第46-47页 |
| 第3章 DHCR24通过清除细胞内的活性氧来抵抗由内质网应激引起的细胞凋亡 | 第47-50页 |
| 3.1 实验材料 | 第47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-48页 |
| 3.3 实验结果 | 第48-49页 |
| 3.4 结论 | 第49-50页 |
| 第4章 DHCR24过表达条件下细胞内胆固醇水平的变化影响及对Caveolin-1、IGF-1R的影响 | 第50-56页 |
| 4.1 实验材料 | 第50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-52页 |
| 4.2.1 细胞内总胆固醇的测定 | 第50-52页 |
| 4.2.2 双重免疫荧光染色检测DHCR24过表达条件下N2A细胞中caveolin-1及IGF-1R的表达情况 | 第52页 |
| 4.3 实验结果 | 第52-55页 |
| 4.3.1 DHCR24过表达条件下细胞内胆固醇水平的变化 | 第52-53页 |
| 4.3.2 由DHCR24过表达引起的细胞内胆固醇水平的升高对Caveolin-1及IGF-R的影响 | 第53-55页 |
| 4.4 结论 | 第55-56页 |
| 第5章 DHCR24过表达保护N2A免于Aβ引起的细胞凋亡 | 第56-60页 |
| 5.1 实验材料 | 第56页 |
| 5.2 试剂配制 | 第56页 |
| 5.3 实验方法 | 第56-57页 |
| 5.3.2 DHCR24过表达条件下Aβ刺激N2A实验 | 第56-57页 |
| 5.3.3 Western blot检测Aβ刺激Bip的表达 | 第57页 |
| 5.4 实验结果 | 第57-58页 |
| 5.5 结论 | 第58-60页 |
| 第6章 讨论 | 第60-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 攻读学位期间发表学术论文及参加科研情况 | 第69页 |
