| 摘要 | 第11-12页 |
| 英文摘要 | 第12-13页 |
| 1.前言 | 第14-21页 |
| 1.1 研究目的及意义 | 第14页 |
| 1.2 研究内容及研究路线 | 第14-15页 |
| 1.2.1 主要研究内容 | 第14-15页 |
| 1.2.2 试验的技术路线图 | 第15页 |
| 1.3 国内外研究进展 | 第15-19页 |
| 1.3.1 蔬菜农药残留 | 第15-18页 |
| 1.3.2 霜霉威研究现状 | 第18-19页 |
| 1.4 AP2转录家族研究现状 | 第19-21页 |
| 1.4.1 AP2大家族的基本信息 | 第19-20页 |
| 1.4.2 DREB转录因子亚族 | 第20页 |
| 1.4.3 DREB抗逆性研究现状 | 第20-21页 |
| 2.材料与方法 | 第21-32页 |
| 2.1 试验种质材料 | 第21页 |
| 2.2 试验试剂及菌株 | 第21页 |
| 2.3 克隆CSDREB1 | 第21-23页 |
| 2.3.1 黄瓜果实RNA的提取和检测 | 第21-22页 |
| 2.3.2 合成cDNA的第一条链 | 第22页 |
| 2.3.3 CsDREB1的克隆 | 第22-23页 |
| 2.3.4 将CsDREB1的PCR扩增产物进行回收 | 第23页 |
| 2.3.5 与pEASY-T3载体的连接及阳性克隆筛选 | 第23页 |
| 2.4 CSDREB1的序列分析 | 第23-24页 |
| 2.5 CSDREB1的表达模式分析 | 第24-25页 |
| 2.6 CSDREB1亚细胞定位分析 | 第25-27页 |
| 2.6.1 构建植物绿色荧光表达载体 | 第25-26页 |
| 2.6.2 纯化质粒 | 第26页 |
| 2.6.3 制备拟南芥原生质体细胞 | 第26页 |
| 2.6.4 CsDREB1-pGII-EGFP质粒的拟南芥原生质体转化 | 第26-27页 |
| 2.7 CsDREB1对拟南芥的遗传转化 | 第27-28页 |
| 2.7.1 构建CsDREB1植物过量表达载体 | 第27页 |
| 2.7.2 重组质粒向根癌农杆菌的导入 | 第27-28页 |
| 2.8 获得CSDREB1转基因拟南芥植株 | 第28-30页 |
| 2.8.1 获得拟南芥转基因植株T0代种子 | 第28-29页 |
| 2.8.2 获得CsDREB1转基因拟南芥纯合株系 | 第29页 |
| 2.8.3 分子鉴定转基因拟南芥 | 第29-30页 |
| 2.8.4 转基因拟南芥霜霉威下功能分析 | 第30页 |
| 2.9 CSDREB1对黄瓜的遗传转化 | 第30-32页 |
| 2.9.1 试验材料与培养基 | 第30页 |
| 2.9.2 转基因实验的相关方法 | 第30-31页 |
| 2.9.3 侵染外植体 | 第31页 |
| 2.9.4 共培养并筛选培养外植体 | 第31页 |
| 2.9.5 分化芽的生根培养及转基因植株的驯化 | 第31页 |
| 2.9.6 确认转基因黄瓜植株并收集黄瓜种子 | 第31-32页 |
| 3.结果与分析 | 第32-47页 |
| 3.1 克隆CSDREB1 | 第32-33页 |
| 3.1.1 提取黄瓜总RNA | 第32页 |
| 3.1.2 获得CsDREB1全长并酶切验证 | 第32-33页 |
| 3.2 CSDREB1的生物信息学分析 | 第33-37页 |
| 3.2.1 CsDREB1的序列分析 | 第33-34页 |
| 3.2.2 CsDREB1的系统进化树分析 | 第34-35页 |
| 3.2.3 分析CsDREB1的启动子区域顺式元件 | 第35-37页 |
| 3.3 CSDREB1的表达模式分析 | 第37-39页 |
| 3.3.1 CsDREB1在高农残品系‘D9320’和低农残品系‘D0351’中的表达分析 | 第37页 |
| 3.3.2 CsDREB1不同时间中的表达分析 | 第37-38页 |
| 3.3.3 CsDREB1不同器官中的表达分析 | 第38-39页 |
| 3.4 CSDREB1编码蛋白的亚细胞定位 | 第39-40页 |
| 3.4.1 CsDREB1-pGII-EGFP融合表达载体的鉴定 | 第39页 |
| 3.4.2 CsDREB1编码蛋白在拟南芥原生质体中的定位 | 第39-40页 |
| 3.5 CSDREB1转基因拟南芥植株的功能分析 | 第40-44页 |
| 3.5.1构建植物过量表达载体pBI121-CsDREB1 | 第40-41页 |
| 3.5.2 植物过量表达载体35S-CsDREB1的根癌农杆菌转化 | 第41-42页 |
| 3.5.3 T0代转基因拟南芥植株的筛选 | 第42页 |
| 3.5.4 PCR鉴定转基因CsDREB1拟南芥植株 | 第42-43页 |
| 3.5.5 过表达CsDREB1拟南芥的功能分析 | 第43-44页 |
| 3.6 其他逆境胁迫下CSDREB1的表达分析 | 第44页 |
| 3.7 黄瓜遗传转化 | 第44-47页 |
| 3.7.1 获得CsDREB1转基因黄瓜植株 | 第44-45页 |
| 3.7.2 鉴定抗性黄瓜植株 | 第45-47页 |
| 4.讨论 | 第47-50页 |
| 4.1 CSDREB1序列分析 | 第47页 |
| 4.2 CSDREB1的表达模式分析 | 第47页 |
| 4.3 CSDREB1的亚细胞定位分析 | 第47-48页 |
| 4.4 过表达CSDREB1拟南芥植株的抗性分析 | 第48页 |
| 4.5 其他胁迫下CSDREB1的表达分析 | 第48页 |
| 4.6 CSDREB1在黄瓜中的遗传转化 | 第48-49页 |
| 4.7 本研究的创新和不足之处 | 第49-50页 |
| 4.7.1 本研究的创新之处 | 第49页 |
| 4.7.2 本研究的不足之处 | 第49-50页 |
| 5.结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录 | 第58-59页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第59页 |
