| 致谢 | 第4-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 脂肪酸的分类 | 第12页 |
| 1.2 长链脂肪酸的合成 | 第12-13页 |
| 1.3 ELOVL基因家族与VLCFA的合成 | 第13-15页 |
| 1.3.1 ELOVL基因家族的发现 | 第13-14页 |
| 1.3.2 ELOVL基因家族的蛋白结构 | 第14页 |
| 1.3.3 ELOVL基因家族与长链脂肪酸的合成 | 第14-15页 |
| 1.4 ELOVL家族的其他生物学功能 | 第15-16页 |
| 1.4.1 参与脂肪酸氧化 | 第15页 |
| 1.4.2 ELOVL家族与代谢疾病的发生 | 第15-16页 |
| 1.5 ELOVL家族基因的表达调控 | 第16-19页 |
| 2 引言 | 第19-20页 |
| 3 鸡ELOVL基因家族的起源进化和生物学特性 | 第20-30页 |
| 3.1 材料与方法 | 第20-21页 |
| 3.1.1 分析材料 | 第20-21页 |
| 3.1.2 分析方法 | 第21页 |
| 3.2 结果与分析 | 第21-28页 |
| 3.2.1 鸡ELOVL基因家族的蛋白结构域分析 | 第21-22页 |
| 3.2.2 鸡ELOVL基因家族氨基酸序列一致性分析 | 第22-23页 |
| 3.2.3 不同物种ELOVL基因家族的系统进化树分析 | 第23-24页 |
| 3.2.4 鸡ELOVL基因家族的共线性分析 | 第24-28页 |
| 3.3 讨论 | 第28-29页 |
| 3.4 小结 | 第29-30页 |
| 4 鸡ELOVL基因家族的时空表达分析 | 第30-41页 |
| 4.1 试验材料 | 第30-31页 |
| 4.1.1 试验样品 | 第30页 |
| 4.1.2 主要实验仪器 | 第30页 |
| 4.1.3 试验试剂和溶液的配置 | 第30-31页 |
| 4.2 试验方法 | 第31-36页 |
| 4.2.1 组织样品总RNA的提取 | 第31-32页 |
| 4.2.2 总RNA样品的质量检测 | 第32页 |
| 4.2.3 单链互补DNA的合成 | 第32页 |
| 4.2.4 cDNA的质量检测 | 第32-33页 |
| 4.2.5 混池cDNA的制备 | 第33页 |
| 4.2.6 实时荧光定量PCR(realtimePCR)引物设计 | 第33-34页 |
| 4.2.7 鸡ELOVL基因家族成员组织表达谱的分析 | 第34-35页 |
| 4.2.8 实时荧光定量PCR反应 | 第35页 |
| 4.2.9 数据分析 | 第35-36页 |
| 4.3 结果与分析 | 第36-39页 |
| 4.3.1 RNA和cDNA质量检测 | 第36页 |
| 4.3.2 实时荧光定量PCR引物的特异性检测 | 第36-37页 |
| 4.3.3 鸡ELOVL基因家族的组织表达规律 | 第37页 |
| 4.3.4 鸡ELOVL基因家族的时序表达规律 | 第37-39页 |
| 4.4 讨论 | 第39-40页 |
| 4.5 小结 | 第40-41页 |
| 5 雌激素对ELOVL基因家族的表达调控研究 | 第41-51页 |
| 5.1 试验材料 | 第41-43页 |
| 5.1.1 试验动物及处理 | 第41页 |
| 5.1.2 肝脏原代细胞 | 第41页 |
| 5.1.3 试验仪器 | 第41-42页 |
| 5.1.4 试验试剂及溶液的配制 | 第42-43页 |
| 5.2 试验方法 | 第43-44页 |
| 5.2.1 肝脏原代细胞的分离与培养 | 第43-44页 |
| 5.2.2 总RNA的提取 | 第44页 |
| 5.2.3 总RNA的质量检测 | 第44页 |
| 5.2.4 反转录及cDNA质量检测 | 第44页 |
| 5.2.5 qPCR反应及引物设计 | 第44页 |
| 5.2.6 数据处理 | 第44页 |
| 5.3 结果与分析 | 第44-49页 |
| 5.3.1 鸡胚肝脏原代细胞的形态观察 | 第44-45页 |
| 5.3.2 组织和细胞中总RNA和反转录cDNA的质量检测 | 第45-46页 |
| 5.3.3 ApoVLDLII基因引物特异性检测 | 第46页 |
| 5.3.4 雌激素处理对鸡肝脏组织和鸡胚肝原代细胞中ApoVLDLII基因表达的影响 | 第46-47页 |
| 5.3.5 雌激素处理对鸡肝脏组织中ELOVL基因家族表达的影响 | 第47-48页 |
| 5.3.6 雌激素处理对鸡胚肝脏原代细胞中ELOVL基因家族表达的影响 | 第48-49页 |
| 5.4 讨论 | 第49-50页 |
| 5.5 小结 | 第50-51页 |
| 6 ELOVL5基因表达的转录后水平调控 | 第51-65页 |
| 6.1 试验材料 | 第51-53页 |
| 6.1.1 试验动物 | 第51页 |
| 6.1.2 鸡胚成纤维细胞系(DF-1)的培养 | 第51页 |
| 6.1.3 试验仪器 | 第51页 |
| 6.1.4 试验主要试剂及溶液的配制 | 第51-52页 |
| 6.1.5 引物设计 | 第52-53页 |
| 6.2 试验方法 | 第53-58页 |
| 6.2.1 鸡ELOVL5基因互作miRNA的测序以及肝脏miRNA数据库分析 | 第53页 |
| 6.2.2 载体构建 | 第53-57页 |
| 6.2.3 miR-218-5p的干扰和过表达 | 第57页 |
| 6.2.4 萤光素酶报告基因分析 | 第57页 |
| 6.2.5 总RNA的提取 | 第57-58页 |
| 6.2.6 qPCR反应 | 第58页 |
| 6.2.7 数据分析 | 第58页 |
| 6.3 结果与分析 | 第58-63页 |
| 6.3.1 鸡ELOVL5基因MicroRNA的靶向预测及生物信息学分析 | 第58-59页 |
| 6.3.2 细胞和组织总RNA和cDNA的质量检测 | 第59页 |
| 6.3.3 qPCR引物特异性检测 | 第59-60页 |
| 6.3.4 ELOVL5基因3’UTR序列的克隆 | 第60页 |
| 6.3.5 载体构建阳性克隆的验证 | 第60-61页 |
| 6.3.6 ELOVL5基因与miRNA-218-5p靶向关系的验证 | 第61-63页 |
| 6.4 讨论 | 第63页 |
| 6.5 小结 | 第63-65页 |
| 7 全文总结 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| ABSTRACT | 第75-77页 |
| 附录 | 第78-79页 |
| 附录1 DNA产物和酶切产物的纯化回收 | 第78-79页 |
| 附录2 质粒的提取 | 第79页 |
