摘要 | 第4-7页 |
ABSTRACT | 第7-9页 |
英文缩略表 | 第10-14页 |
前言 | 第14-18页 |
1 材料、试剂、仪器 | 第18-24页 |
1.1 实验材料 | 第18-19页 |
1.1.1 临床标本及病例资料 | 第18页 |
1.1.2 质粒来源 | 第18页 |
1.1.3 细胞来源 | 第18-19页 |
1.2 主要试剂 | 第19-20页 |
1.3 主要试剂配制 | 第20-23页 |
1.3.1 1M Tris-HCl溶液的配制(100mL) | 第20页 |
1.3.2 0.5mol/L EDTA溶液的配制(100mL) | 第20页 |
1.3.3 TE溶液的配制(100mL) | 第20页 |
1.3.4 LB平板的配制(100mL) | 第20-21页 |
1.3.5 LB液体培养基的配制(100mL) | 第21页 |
1.3.6 0.1mol/L Ca Cl2的配制(100mL) | 第21页 |
1.3.7 DMEM培养基的配制(1 L) | 第21页 |
1.3.8 RNA提取专用 75% 乙醇溶液 200mL | 第21-22页 |
1.3.9 PBS磷酸盐缓冲溶液(2 L) | 第22页 |
1.3.10 4%中性多聚甲醛溶液(1 L) | 第22页 |
1.3.11 0.2mol/L EGTA溶液 100mL | 第22页 |
1.3.12 组织裂解液(100mL) | 第22-23页 |
1.4 仪器 | 第23-24页 |
2 实验方法与步骤 | 第24-38页 |
2.1 HE染色 | 第24页 |
2.2 免疫组织化学染色 | 第24-25页 |
2.3 细胞培养 | 第25-26页 |
2.3.1 细胞的复苏 | 第25-26页 |
2.3.2 细胞的传代 | 第26页 |
2.3.3 细胞的冻存 | 第26页 |
2.4 细胞转染 | 第26-27页 |
2.5 双荧光素酶报告基因检测 | 第27页 |
2.6 细胞内蛋白质的提取 | 第27页 |
2.7 ELISA | 第27-28页 |
2.8 细胞基因组DNA提取 | 第28页 |
2.9 引物的溶解和稀释 | 第28页 |
2.10 HepG2细胞及小鼠肝组织RNA提取 | 第28-29页 |
2.11 CDNA反转录 | 第29-30页 |
2.12 荧光定量PCR | 第30页 |
2.13 基因重组 | 第30-33页 |
2.13.1 DH5α感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
2.13.2 转化 | 第31页 |
2.13.3 质粒提取 | 第31-33页 |
2.14 C57BL/6 及FXR~(-/-)小鼠尾静脉高压注射质粒 | 第33-34页 |
2.15 小鼠血清及细胞上清病毒DNA提取 | 第34-35页 |
2.16 小鼠肝组织蛋白提取 | 第35页 |
2.17 BCA蛋白定量试剂盒测蛋白浓度 | 第35-36页 |
2.18 统计学分析 | 第36-38页 |
3 结果 | 第38-50页 |
3.1 肝脏毛玻璃样变性与肝内HBs Ag有关 | 第38页 |
3.2 HBV感染者肝脏中HBs Ag与血清总胆汁酸含量关系 | 第38-39页 |
3.3 HBV感染者肝脏中HBs Ag与肝内CYP7A1呈正相关 | 第39-40页 |
3.4 在HepG2中,FXR拮抗剂Z-Guggulsterone抑制HBs Ag的表达 | 第40页 |
3.5 在HepG2中,FXR拮抗剂Z-Guggulsterone抑制HBe Ag的表达 | 第40-41页 |
3.6 胆汁酸受体FXR增强pre-S1、pre-S2启动子的转录 | 第41-42页 |
3.7 在Hep G2中转染p AAV/HBV1.2 质粒后,FXR+CDCA组固有免疫分子TLR2的表达下降 | 第42页 |
3.8 胞内及细胞上清病毒DNA | 第42-43页 |
3.9 在Hep G2中,转染p AAV/HBV1.2 HBe Ag-null后,FXR+CDCA组固有免疫分子TLR2表达不再下调 | 第43-44页 |
3.10 FXR~(-/-)小鼠HBs Ag表达下降 | 第44-45页 |
3.11 FXR~(-/-)小鼠HBe Ag表达下降 | 第45页 |
3.12 HBV小鼠血清病毒DNA | 第45-46页 |
3.13 FXR~(-/-)小鼠肝脏HBc Ag表达下降 | 第46页 |
3.14 FXR~(-/-)小鼠血清HBc Ab下降 | 第46-47页 |
3.15 HBV小鼠血清中IL-10 的表达 | 第47页 |
3.16 在HBV感染FXR~(-/-)小鼠模型中,FXR~(-/-)小鼠肝脏固有免疫分子TLR2升高 | 第47-48页 |
3.17 HBV感染小鼠的肝脏HE染色 | 第48页 |
3.18 HBV感染小鼠血清中转氨酶变化 | 第48-50页 |
4 讨论 | 第50-54页 |
5 结论 | 第54-56页 |
参考文献 | 第56-60页 |
综述 乙型肝炎病毒和胆汁酸相互关系的研究进展 | 第60-68页 |
参考文献 | 第66-68页 |
致谢 | 第68-69页 |