| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 1 绪论 | 第9-12页 |
| 1.1 欧李简介 | 第9页 |
| 1.2 干旱胁迫对植物的影响 | 第9-10页 |
| 1.3 干旱胁迫下植物的响应机制 | 第10页 |
| 1.4 交替氧化酶的国内外研究进展 | 第10页 |
| 1.5 本研究目的及意义 | 第10-11页 |
| 1.6 主要研究内容 | 第11-12页 |
| 2 干旱胁迫相关基因的表达分析 | 第12-18页 |
| 2.1 实验材料 | 第12页 |
| 2.1.1 欧李的培养与取材方法 | 第12页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第12页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第12页 |
| 2.2 实验方法 | 第12-15页 |
| 2.2.1 欧李总RNA的提取 | 第12-13页 |
| 2.2.2 欧李总RNA的消化及纯化 | 第13页 |
| 2.2.3 反转录合成cDNA | 第13-14页 |
| 2.2.4 引物的设计及合成 | 第14页 |
| 2.2.5 RT-PCR | 第14页 |
| 2.2.6 荧光定量PCR | 第14-15页 |
| 2.3 结果与分析 | 第15-16页 |
| 2.3.1 欧李总RNA的提取 | 第15页 |
| 2.3.2 RT-PCR | 第15页 |
| 2.3.3 荧光定量PCR | 第15-16页 |
| 2.4 讨论 | 第16-17页 |
| 2.5 本章小结 | 第17-18页 |
| 3 欧李AOX2基因的载体构建 | 第18-27页 |
| 3.1 实验材料 | 第18页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第18页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第18页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第18页 |
| 3.2 实验方法 | 第18-23页 |
| 3.2.1 原核表达载体PET-32a-AOX2和pGEX-4T-3-AOX2的构建 | 第18-21页 |
| 3.2.2 正义植物表达载体pROK2-sAOX2的构建 | 第21-22页 |
| 3.2.3 反义植物表达载体pROK2-aAOX2的构建 | 第22-23页 |
| 3.3 实验结果 | 第23-25页 |
| 3.3.1 原核表达载体PET-32a-AOX2的构建 | 第23-24页 |
| 3.3.2 原核表达载体pGEX-4T-3-AOX2的构建 | 第24页 |
| 3.3.3 正义植物表达载体pROK2-sAOX2的构建 | 第24-25页 |
| 3.3.4 反义植物表达载体pROK2-aAOX2的构建 | 第25页 |
| 3.4 讨论 | 第25页 |
| 3.5 本章小结 | 第25-27页 |
| 4 欧李AOX2基因的原核表达及纯化 | 第27-40页 |
| 4.1 实验材料 | 第27页 |
| 4.1.1 菌株 | 第27页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第27页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第27页 |
| 4.2 实验方法 | 第27-31页 |
| 4.2.1 pGEX-4T-3-A转化大肠杆菌 | 第27-28页 |
| 4.2.2 融合蛋白GST-AOX2的诱导表达 | 第28页 |
| 4.2.3 SDS-PAGE | 第28-29页 |
| 4.2.4 融合蛋白GST-AOX2表达条件优化 | 第29页 |
| 4.2.5 GST融合蛋白的纯化 | 第29-30页 |
| 4.2.6 Western blot鉴定 | 第30-31页 |
| 4.3 结果与分析 | 第31-38页 |
| 4.3.1 欧李交替氧化酶生物信息学分析 | 第31-36页 |
| 4.3.2 宿主菌对GST-AOX2表达的影响 | 第36页 |
| 4.3.3 融合蛋白表达条件初步优化 | 第36-37页 |
| 4.3.4 GST融合蛋白纯化 | 第37-38页 |
| 4.3.5 Western blot分析 | 第38页 |
| 4.4 讨论 | 第38-39页 |
| 4.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 5 欧李AOX2基因遗传转化拟南芥 | 第40-44页 |
| 5.1 实验材料 | 第40页 |
| 5.1.1 主要仪器 | 第40页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 5.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 5.2.1 植物表达载体转化农杆菌 | 第40-41页 |
| 5.2.2 拟南芥的培养 | 第41页 |
| 5.2.3 农杆菌遗传转化拟南芥 | 第41-42页 |
| 5.2.4 转基因植株的鉴定 | 第42页 |
| 5.2.5 T1代种子筛选 | 第42页 |
| 5.3 结果与分析 | 第42-43页 |
| 5.4 讨论 | 第43页 |
| 5.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
