| 提要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-17页 |
| 1.BMSCs生物学特性 | 第11-12页 |
| 2.促进BMSCs成骨分化的基因种类 | 第12-14页 |
| 2.1 骨形态发生蛋白基因 | 第12页 |
| 2.2 LIM矿化蛋白基因 | 第12-13页 |
| 2.3 TGF-β1 基因 | 第13页 |
| 2.4 其它相关基因 | 第13-14页 |
| 3 基因转染的相关载体 | 第14-15页 |
| 3.1 逆转录病毒载体 | 第14页 |
| 3.2 慢病毒载体 | 第14页 |
| 3.3 腺相关病毒 | 第14-15页 |
| 3.4 非病毒脂质体或脂质复合物载体 | 第15页 |
| 4. BMSCs在骨组织工程中的应用 | 第15-16页 |
| 4.1 股骨头坏死 | 第15页 |
| 4.2 修复软骨损伤和骨缺损 | 第15-16页 |
| 5 前景 | 第16-17页 |
| 第二部分 大鼠BMSCs的分离培养以及鉴别 | 第17-24页 |
| 1 实验仪器与材料 | 第17-18页 |
| 1.1 主要试剂及耗材 | 第17-18页 |
| 1.2 实验动物 | 第18页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第18页 |
| 2 试剂的配制 | 第18-19页 |
| 3 实验方法 | 第19-20页 |
| 3.1 大鼠BMSCs的分离培养 | 第19页 |
| 3.2 Giemsa染色 | 第19-20页 |
| 3.3 BMSCs生长曲线的绘制 | 第20页 |
| 3.4 骨髓间质干细胞的鉴定 | 第20页 |
| 4 结果 | 第20-22页 |
| 4.1 BMSCs形态学观察 | 第20-21页 |
| 4.2 Giemsa染色染色结果 | 第21页 |
| 4.3 BMSCs生长曲线和表型鉴定 | 第21-22页 |
| 5 小结 | 第22-24页 |
| 第三部分 携带hBMP7基因的慢病毒载体的构建和体外表达 | 第24-40页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第24-25页 |
| 1.1 载体信息 | 第24页 |
| 1.2 实验试剂 | 第24-25页 |
| 1.3 主要实验仪器 | 第25页 |
| 2 实验方法 | 第25-31页 |
| 2.1 BMP7基因慢病毒载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.2 转化感受态 | 第26-27页 |
| 2.3 构建成功后阳性单克隆的鉴定 | 第27页 |
| 2.4 病毒的包装 | 第27页 |
| 2.5 慢病毒颗粒PLV-sf GFP(2A)-BMP7转染大鼠BMSCs | 第27-28页 |
| 2.6 RT-PCR检测转染细胞h BMP-7 的表达 | 第28-30页 |
| 2.7 Western-blot检测各组细胞BMP7蛋白的表达 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-38页 |
| 3.1 BMP7目的基因的获取及骨架载体的酶切 | 第31-33页 |
| 3.2 重组载体的验证 | 第33-36页 |
| 3.3 RT-PCR检测转染细胞BMP-7 基因水平表达 | 第36-37页 |
| 3.4 Western-blot检测转染后细胞BMP7蛋白水平的表达 | 第37-38页 |
| 4 小结 | 第38-40页 |
| 第四部分 鹿角胶对转染BMSCs的成骨性诱导 | 第40-51页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第40-41页 |
| 1.1 药材 | 第40页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第40-41页 |
| 1.3 主要实验试剂与仪器 | 第41页 |
| 2 试剂的配制 | 第41页 |
| 3 实验方法 | 第41-45页 |
| 3.1 鹿角胶复合培养基的制备 | 第41-42页 |
| 3.2 实验分组及处理 | 第42页 |
| 3.3 CCK-8 法检测细胞的增殖情况 | 第42页 |
| 3.4 碱性磷酸酶的活力的测定 | 第42-43页 |
| 3.5 ELISA法骨钙素测定 | 第43页 |
| 3.6 钙化结节染色（茜素红法） | 第43页 |
| 3.7 RT-PCR检测成骨细胞Ⅰ型胶原及整合素 α2β1 的mRNA水平变化 | 第43-45页 |
| 3.8 统计学方法 | 第45页 |
| 4.结果 | 第45-49页 |
| 4.1 鹿角胶性状 | 第45-46页 |
| 4.2 细胞增殖的检测结果 | 第46页 |
| 4.3 碱性磷酸酶定量检测 | 第46-47页 |
| 4.4 ELISA法测定骨钙素 | 第47-48页 |
| 4.5 钙化结节染色 | 第48-49页 |
| 4.6 各组细胞Ⅰ型胶原及整合素 α2、β1 的mRNA水平变化 | 第49页 |
| 5 小结 | 第49-51页 |
| 第五部分 结语 | 第51-53页 |
| 1 目的基因的选择 | 第51页 |
| 2 基因载体的选择 | 第51页 |
| 3 携带BMP7基因慢病毒的构建与转染 | 第51页 |
| 4 鹿角胶联合基因转染对BMSCs的作用 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 论文著作 | 第59-60页 |
| 详细摘要 | 第60-63页 |
