| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-24页 |
| 1.1 猪β干扰素研究进展 | 第10-15页 |
| 1.1.1 PoIFN-β的理化特性和结构特征 | 第10-11页 |
| 1.1.2 PoIFN-β体外表达研究进展 | 第11-13页 |
| 1.1.3 PoIFN-β的生物学活性机制 | 第13-15页 |
| 1.1.4 PoIFN-β的应用前景 | 第15页 |
| 1.2 毕赤酵母分泌型表达 | 第15-23页 |
| 1.2.1 毕赤酵母系统的构成 | 第16页 |
| 1.2.2 源于GAP启动子的毕赤酵母表达进展 | 第16-17页 |
| 1.2.3 影响外源基因在毕赤酵母表达的因素 | 第17-23页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 第二章 PoIFN-β优化基因在毕赤酵母中的分泌型表达 | 第24-42页 |
| 2.1 材料与方法 | 第24-30页 |
| 2.1.1 菌种与质粒 | 第24-25页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第25页 |
| 2.1.3 主要试剂及配制 | 第25-26页 |
| 2.1.4 PoIFN-β成熟肽基因密码子优化 | 第26页 |
| 2.1.5 PoIFN-β成熟肽基因克隆引物设计与合成 | 第26页 |
| 2.1.6 PoIFN-β成熟肽基因的获得 | 第26页 |
| 2.1.7 PoIFN-β成熟肽片段分别与两种载体的双酶切反应 | 第26-27页 |
| 2.1.8 PoIFN-β成熟肽片段分别与两种载体的连接反应 | 第27页 |
| 2.1.9 连接产物热击转化Top10F’感受态细胞 | 第27页 |
| 2.1.10 大肠杆菌阳性转化子的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.1.11 两种重组质粒的线性化处理 | 第28页 |
| 2.1.12 乙醇沉淀回收线性化DNA | 第28页 |
| 2.1.13 X33电感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| 2.1.14 两种重组载体的电击转化 | 第29页 |
| 2.1.15 酵母阳性转化子的鉴定 | 第29页 |
| 2.1.16 pPICZαA-PoIFN-β-X33的甲醇诱导分泌型表达 | 第29页 |
| 2.1.17 pGAPZαA-PoIFN-β-X33的组成分泌型表达 | 第29-30页 |
| 2.2 结果 | 第30-38页 |
| 2.2.1 PoIFN-β成熟肽基因密码子优化结果 | 第30-33页 |
| 2.2.2 PoIFN-β成熟肽基因的获得 | 第33页 |
| 2.2.3 PoIFN-β成熟肽片段与两种载体的双酶切结果 | 第33-34页 |
| 2.2.4 大肠杆菌阳性转化子鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.5 乙醇沉淀回收线性化DNA | 第35-36页 |
| 2.2.6 毕赤酵母阳性转化子的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.2.7 pPICZαA-PoIFN-β-X33的甲醇诱导分泌型表达 | 第37-38页 |
| 2.2.8 pGAPZαA-PoIFN-β-X33的组成分泌型表达 | 第38页 |
| 2.3 讨论与分析 | 第38-40页 |
| 2.3.1 密码子优化 | 第38-39页 |
| 2.3.2 载体-宿主菌的选择 | 第39-40页 |
| 2.3.3 PoIFN-β在毕赤酵母中的分泌型表达 | 第40页 |
| 2.4 小结 | 第40-42页 |
| 第三章 PoIFN-β在毕赤酵母组成分泌型表达的条件优化 | 第42-54页 |
| 3.1 材料与方法 | 第42-45页 |
| 3.1.1 主要仪器 | 第42页 |
| 3.1.2 主要试剂及配制 | 第42-43页 |
| 3.1.3 多拷贝重组子的筛选 | 第43页 |
| 3.1.4 酵母培养基最初pH值对PoIFN-β在毕赤酵母表达的影响 | 第43页 |
| 3.1.5 甘油碳源的补加对重组PoIFN-β产量的影响 | 第43页 |
| 3.1.6 BMGY和YPD培养基对重组PoIFN-β产量的影响 | 第43-44页 |
| 3.1.7 不同抗性筛选菌株对重组PoIFN-β产量的影响 | 第44页 |
| 3.1.8 不同接种量对PoIFN-β在毕赤酵母表达的影响 | 第44页 |
| 3.1.9 重组PoIFN-β在毕赤酵母组成分泌型表达最佳时间的摸索 | 第44-45页 |
| 3.2 结果 | 第45-49页 |
| 3.2.1 多拷贝重组子的筛选 | 第45页 |
| 3.2.2 酵母培养基最初pH值对PoIFN-β在毕赤酵母表达的影响 | 第45-46页 |
| 3.2.3 甘油碳源的补加对重组PoIFN-β产量的影响 | 第46-47页 |
| 3.2.4 BMGY和YPD培养基对重组PoIFN-β产量的影响 | 第47页 |
| 3.2.5 不同抗性筛选菌株对重组PoIFN-β产量的影响 | 第47-48页 |
| 3.2.6 不同接种量对PoIFN-β在毕赤酵母表达的影响 | 第48页 |
| 3.2.7 重组PoIFN-β在毕赤酵母组成分泌型表达最佳时间的摸索 | 第48-49页 |
| 3.3 分析与讨论 | 第49-52页 |
| 3.3.1 基因拷贝数 | 第49-50页 |
| 3.3.2 pH值 | 第50-51页 |
| 3.3.3 碳源 | 第51页 |
| 3.3.4 培养基 | 第51页 |
| 3.3.5 接种量 | 第51-52页 |
| 3.4 小结 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
