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猪β干扰素在毕赤酵母中的分泌型表达及条件优化

摘要第4-5页
Abstract第5-6页
第一章 文献综述第10-24页
    1.1 猪β干扰素研究进展第10-15页
        1.1.1 PoIFN-β的理化特性和结构特征第10-11页
        1.1.2 PoIFN-β体外表达研究进展第11-13页
        1.1.3 PoIFN-β的生物学活性机制第13-15页
        1.1.4 PoIFN-β的应用前景第15页
    1.2 毕赤酵母分泌型表达第15-23页
        1.2.1 毕赤酵母系统的构成第16页
        1.2.2 源于GAP启动子的毕赤酵母表达进展第16-17页
        1.2.3 影响外源基因在毕赤酵母表达的因素第17-23页
    1.3 本研究的目的与意义第23-24页
第二章 PoIFN-β优化基因在毕赤酵母中的分泌型表达第24-42页
    2.1 材料与方法第24-30页
        2.1.1 菌种与质粒第24-25页
        2.1.2 主要仪器第25页
        2.1.3 主要试剂及配制第25-26页
        2.1.4 PoIFN-β成熟肽基因密码子优化第26页
        2.1.5 PoIFN-β成熟肽基因克隆引物设计与合成第26页
        2.1.6 PoIFN-β成熟肽基因的获得第26页
        2.1.7 PoIFN-β成熟肽片段分别与两种载体的双酶切反应第26-27页
        2.1.8 PoIFN-β成熟肽片段分别与两种载体的连接反应第27页
        2.1.9 连接产物热击转化Top10F’感受态细胞第27页
        2.1.10 大肠杆菌阳性转化子的鉴定第27-28页
        2.1.11 两种重组质粒的线性化处理第28页
        2.1.12 乙醇沉淀回收线性化DNA第28页
        2.1.13 X33电感受态细胞的制备第28-29页
        2.1.14 两种重组载体的电击转化第29页
        2.1.15 酵母阳性转化子的鉴定第29页
        2.1.16 pPICZαA-PoIFN-β-X33的甲醇诱导分泌型表达第29页
        2.1.17 pGAPZαA-PoIFN-β-X33的组成分泌型表达第29-30页
    2.2 结果第30-38页
        2.2.1 PoIFN-β成熟肽基因密码子优化结果第30-33页
        2.2.2 PoIFN-β成熟肽基因的获得第33页
        2.2.3 PoIFN-β成熟肽片段与两种载体的双酶切结果第33-34页
        2.2.4 大肠杆菌阳性转化子鉴定第34-35页
        2.2.5 乙醇沉淀回收线性化DNA第35-36页
        2.2.6 毕赤酵母阳性转化子的鉴定第36-37页
        2.2.7 pPICZαA-PoIFN-β-X33的甲醇诱导分泌型表达第37-38页
        2.2.8 pGAPZαA-PoIFN-β-X33的组成分泌型表达第38页
    2.3 讨论与分析第38-40页
        2.3.1 密码子优化第38-39页
        2.3.2 载体-宿主菌的选择第39-40页
        2.3.3 PoIFN-β在毕赤酵母中的分泌型表达第40页
    2.4 小结第40-42页
第三章 PoIFN-β在毕赤酵母组成分泌型表达的条件优化第42-54页
    3.1 材料与方法第42-45页
        3.1.1 主要仪器第42页
        3.1.2 主要试剂及配制第42-43页
        3.1.3 多拷贝重组子的筛选第43页
        3.1.4 酵母培养基最初pH值对PoIFN-β在毕赤酵母表达的影响第43页
        3.1.5 甘油碳源的补加对重组PoIFN-β产量的影响第43页
        3.1.6 BMGY和YPD培养基对重组PoIFN-β产量的影响第43-44页
        3.1.7 不同抗性筛选菌株对重组PoIFN-β产量的影响第44页
        3.1.8 不同接种量对PoIFN-β在毕赤酵母表达的影响第44页
        3.1.9 重组PoIFN-β在毕赤酵母组成分泌型表达最佳时间的摸索第44-45页
    3.2 结果第45-49页
        3.2.1 多拷贝重组子的筛选第45页
        3.2.2 酵母培养基最初pH值对PoIFN-β在毕赤酵母表达的影响第45-46页
        3.2.3 甘油碳源的补加对重组PoIFN-β产量的影响第46-47页
        3.2.4 BMGY和YPD培养基对重组PoIFN-β产量的影响第47页
        3.2.5 不同抗性筛选菌株对重组PoIFN-β产量的影响第47-48页
        3.2.6 不同接种量对PoIFN-β在毕赤酵母表达的影响第48页
        3.2.7 重组PoIFN-β在毕赤酵母组成分泌型表达最佳时间的摸索第48-49页
    3.3 分析与讨论第49-52页
        3.3.1 基因拷贝数第49-50页
        3.3.2 pH值第50-51页
        3.3.3 碳源第51页
        3.3.4 培养基第51页
        3.3.5 接种量第51-52页
    3.4 小结第52-54页
参考文献第54-60页
致谢第60-61页
作者简介第61页

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