| 中文摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 第一篇 文献综述 | 第15-29页 |
| 第1章 载脂蛋白E基因功能 | 第15-20页 |
| 1.1 ApoE的多态性 | 第15-16页 |
| 1.2 ApoE的结构和功能 | 第16-17页 |
| 1.3 ApoE在正常脂蛋白代谢中的作用 | 第17-19页 |
| 1.4 ApoE亚型调节脂质水平的作用 | 第19-20页 |
| 第2章 载脂蛋白E和动脉粥样硬化 | 第20-23页 |
| 2.1 ApoE和动脉粥样硬化 | 第20-21页 |
| 2.2 ApoE基因敲除动物模型 | 第21-23页 |
| 第3章 基因编辑技术概况 | 第23-29页 |
| 3.1 基因编辑发展史 | 第23-25页 |
| 3.1.1 Cre-lox | 第23-24页 |
| 3.1.2 锌指核酸酶(ZincFingerNucleases) | 第24页 |
| 3.1.3 TANLENs | 第24-25页 |
| 3.2 CRISPR | 第25-29页 |
| 3.2.1 CRISPR/Cas:天然免疫系统 | 第25-26页 |
| 3.2.2 CRISPR/Cas9的应用 | 第26-28页 |
| 3.2.3 CRISPR/Cas9技术的生物安全性 | 第28-29页 |
| 第二篇 研究内容 | 第29-61页 |
| 第1章 CRISPR/CAS9介导的载脂蛋白E基因敲除猪的建立 | 第29-47页 |
| 1.1 材料 | 第29-30页 |
| 1.1.1 细胞系及实验动物 | 第29页 |
| 1.1.2 质粒 | 第29-30页 |
| 1.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第30页 |
| 1.1.4 主要试验仪器 | 第30页 |
| 1.1.5 所用软件 | 第30页 |
| 1.2 方法 | 第30-39页 |
| 1.2.1 sgRNA表达载体的构建 | 第30-34页 |
| 1.2.2 验证sgRNA切割效率 | 第34-37页 |
| 1.2.3 挑取单克隆细胞 | 第37-38页 |
| 1.2.4 筛选阳性克隆 | 第38页 |
| 1.2.4 阳性细胞核移植和胚胎移植 | 第38-39页 |
| 1.3 结果 | 第39-45页 |
| 1.3.1 PX330-sgRNA载体的鉴定 | 第39页 |
| 1.3.2 sgRNA切割效率鉴定 | 第39-41页 |
| 1.3.3 鉴定apoE基因敲除效率 | 第41-42页 |
| 1.3.4 阳性克隆细胞筛选 | 第42-45页 |
| 1.3.5 核移植和胚胎移植 | 第45页 |
| 1.4 讨论 | 第45-46页 |
| 1.5 小结 | 第46-47页 |
| 第2章 克隆猪载脂蛋白E鉴定与肝脏表型分析 | 第47-61页 |
| 2.1 材料 | 第47-48页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第47页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第47页 |
| 2.1.3 动物材料 | 第47-48页 |
| 2.2 方法 | 第48-54页 |
| 2.2.1 基因型鉴定 | 第48-49页 |
| 2.2.2 肝脏蛋白检测 | 第49-53页 |
| 2.2.3 肝脏脂质含量检测 | 第53-54页 |
| 2.3 结果 | 第54-59页 |
| 2.3.1 克隆猪apoE基因型鉴定 | 第54-55页 |
| 2.3.2 克隆猪apoE表型鉴定 | 第55-56页 |
| 2.3.3 肝脏脂质含量检测 | 第56-57页 |
| 2.3.4 肝脏脂质调节因子检测 | 第57页 |
| 2.3.5 肝脏炎症因子检测 | 第57-59页 |
| 2.4 讨论 | 第59-60页 |
| 2.5 小结 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-71页 |
| 导师简介 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
