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高糖/oxLDL状态下整合素avβ5介导肝窦毛细血管化的分子机制及干预研究

中文摘要第3-6页
Abstract第6-9页
第一章 前言第14-22页
    1.1 糖尿病第14页
    1.2 糖尿病合并脂肪肝第14-15页
    1.3 氧化型低密度脂蛋白第15-16页
    1.4 肝窦毛细血管化第16-17页
    1.5 整合素第17-18页
    1.6 黏着斑激酶(FAK)/RhoGTPases信号通路第18-19页
    1.7 胰高糖素样肽-1(GLP-1)第19-20页
    1.8 研究目的和意义第20-22页
第二章 整合素avβ5在肝窦内皮细胞和糖尿病性脂肪肝肝组织中的表达和分布第22-47页
    2.1 实验材料第22-28页
        2.1.1 实验主要试剂第22-24页
        2.1.2 实验主要仪器第24-25页
        2.1.3 细胞株第25-26页
        2.1.4 实验动物第26页
        2.1.5 主要实验液体配制第26-28页
    2.2 实验方法第28-37页
        2.2.1 目的细胞的准备第28-29页
        2.2.2 HLSECs细胞的实验分组第29-31页
        2.2.3 qRT-PCR检测肝窦内皮细胞(HLSECs)的Vn和avβ5mRNA的表达第31-33页
        2.2.4 Westblot检测肝窦内皮细胞整合素avβ5和Vn蛋白的表达第33-34页
        2.2.5 糖尿病性脂肪肝动物模型的建立第34页
        2.2.6 样品采集及处理方法第34-35页
        2.2.7 Masson等染色及普通光镜观察第35-36页
        2.2.8 免疫组化检测Vn和avβ5蛋白的表达第36页
        2.2.9 透射电镜标本的制备及观察第36-37页
        2.2.10 统计学分析第37页
    2.3 实验结果第37-45页
        2.3.1 人肝窦内皮细胞形态的观察第37-38页
        2.3.2 高糖和oxLDL对肝窦内皮细胞形态的影响第38页
        2.3.3 不同浓度葡萄糖在不同时间对肝窦内皮细胞Vn和avβ5表达的影响第38页
        2.3.4 不同浓度oxLDL在不同时间对肝窦内皮细胞Vn和avβ5表达的影响第38-40页
        2.3.5 糖尿病合并脂肪肝大鼠模型建立及肝脏病理学特点第40-42页
        2.3.6 糖尿病合并脂肪肝大鼠肝窦的超微结构特点第42-43页
        2.3.7 整合素avβ5在糖尿病性脂肪肝大鼠肝脏中的表达和分布第43-45页
    2.4 讨论第45-47页
第三章 整合素avβ5介导高糖和oxLDL诱导的肝窦毛细血管化及其机制研究第47-68页
    3.1 实验材料第47-49页
        3.1.1 实验试剂第47-48页
        3.1.2 实验器材第48页
        3.1.3 主要液体的配制第48-49页
    3.2 实验方法第49-58页
        3.2.1 细胞转染实验第49-56页
        3.2.2 RT-PCR检测病毒转染前后肝窦内皮细胞Vn等mRNA的表达第56页
        3.2.3 WesternBlot方法检测肝窦内皮细胞Vn等蛋白表达的变化第56页
        3.2.4 细胞免疫荧光检测肝窦内皮细胞的Vn等蛋白的表达第56-57页
        3.2.5 扫描电镜观察肝窦内皮细胞窗孔形态第57页
        3.2.6 整合素avβ5抑制剂对大鼠FAK/RhoGTPase信号通路蛋白的影响第57页
        3.2.7 RT-PCR检测大鼠肝组织的αvβ5、FAK、RhoA和Rac1的mRNA结果第57页
        3.2.8 免疫组化检测各组αvβ5、FAK、RhoA和Rac1的蛋白表达第57-58页
        3.2.9 统计学分析第58页
    3.3 实验结果第58-65页
        3.3.1 高糖和oxLDL对肝窦内皮细胞窗孔的影响第58页
        3.3.2 高糖和oxLDL刺激下整合素avβ5对HLSECs窗孔的影响第58-59页
        3.3.3 整合素avβ5介导高糖和oxLDL诱导的肝窦毛细血管化第59-61页
        3.3.4 整合素αvβ5沉默后FAK、RhoA和Rac1表达第61-63页
        3.3.5 整合素avβ5抑制剂在体内对FAK/RhoGTPase信号通路蛋白表达的影响第63-65页
    3.4 讨论第65-68页
第四章 整合素avβ5抑制剂对糖尿病性脂肪肝肝组织形态和功能的影响第68-77页
    4.1 实验材料第68-69页
        4.1.1 实验试剂第68页
        4.1.2 实验器材第68页
        4.1.3 高脂饲料第68-69页
        4.1.4 实验动物第69页
        4.1.5 主要试剂的配制第69页
    4.2 实验方法第69-71页
        4.2.1 分组及干预措施第69-70页
        4.2.2 RT-PCR检测Vn等mRNA的表达第70页
        4.2.3 Westblot检测Vn等蛋白的表达第70页
        4.2.4 血浆生化指标的检测第70-71页
    4.3 实验结果第71-75页
        4.3.1 整合素avβ5抑制剂对糖尿病性脂肪肝细胞形态的影响第71-74页
        4.3.2 整合素avβ5抑制剂对肝窦毛细血管化的影响第74-75页
        4.3.3 整合素avβ5抑制剂对糖尿病性脂肪肝大鼠肝功能的影响第75页
        4.3.4 整合素avβ5抑制剂对糖尿病脂肪肝大鼠一般资料及代谢参数的影响第75页
    4.4 讨论第75-77页
第五章 GLP-1通过调节整合素avβ5的表达对肝窦毛细管化的影响第77-86页
    5.1 实验材料第77页
        5.1.1 实验主要试剂第77页
        5.1.2 实验主要器材第77页
    5.2 实验方法第77-79页
        5.2.1 实验动物分组及干预措施第77-78页
        5.2.2 肝窦内皮细胞的培养和分组第78页
        5.2.3 动物标本的收集及取材第78页
        5.2.4 实时荧光定量RT-PCR测整合素av、β5和VnmRNA的表达第78页
        5.2.5 Westernblot检测Vn蛋白的表达第78页
        5.2.6 免疫组化检测Vn蛋白的表达第78页
        5.2.7 免疫荧光检测Vn蛋白的表达第78页
        5.2.8 透射电镜检测体内肝组织肝窦基底膜厚度的变化第78-79页
        5.2.9 扫描电镜检测体外肝窦内皮细胞窗孔的变化第79页
        5.2.10 统计学方法第79页
    5.3 结果第79-84页
        5.3.1 GLP-1能够抑制HLSEC细胞、大鼠血清及肝组织中整合素avβ5的表达第79-80页
        5.3.2 GLP-1能够抑制整合素avβ5诱导的肝窦毛细血管化第80-83页
        5.3.3 GLP-1对糖尿病性脂肪肝大鼠肝细胞形态及功能的影响第83-84页
    5.4 讨论第84-86页
结论第86-87页
参考文献第87-95页
缩略词表第95-97页
攻读学位期间的研究成果第97-98页
致谢第98-99页

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