中文摘要 | 第3-6页 |
Abstract | 第6-9页 |
第一章 前言 | 第14-22页 |
1.1 糖尿病 | 第14页 |
1.2 糖尿病合并脂肪肝 | 第14-15页 |
1.3 氧化型低密度脂蛋白 | 第15-16页 |
1.4 肝窦毛细血管化 | 第16-17页 |
1.5 整合素 | 第17-18页 |
1.6 黏着斑激酶(FAK)/RhoGTPases信号通路 | 第18-19页 |
1.7 胰高糖素样肽-1(GLP-1) | 第19-20页 |
1.8 研究目的和意义 | 第20-22页 |
第二章 整合素avβ5在肝窦内皮细胞和糖尿病性脂肪肝肝组织中的表达和分布 | 第22-47页 |
2.1 实验材料 | 第22-28页 |
2.1.1 实验主要试剂 | 第22-24页 |
2.1.2 实验主要仪器 | 第24-25页 |
2.1.3 细胞株 | 第25-26页 |
2.1.4 实验动物 | 第26页 |
2.1.5 主要实验液体配制 | 第26-28页 |
2.2 实验方法 | 第28-37页 |
2.2.1 目的细胞的准备 | 第28-29页 |
2.2.2 HLSECs细胞的实验分组 | 第29-31页 |
2.2.3 qRT-PCR检测肝窦内皮细胞(HLSECs)的Vn和avβ5mRNA的表达 | 第31-33页 |
2.2.4 Westblot检测肝窦内皮细胞整合素avβ5和Vn蛋白的表达 | 第33-34页 |
2.2.5 糖尿病性脂肪肝动物模型的建立 | 第34页 |
2.2.6 样品采集及处理方法 | 第34-35页 |
2.2.7 Masson等染色及普通光镜观察 | 第35-36页 |
2.2.8 免疫组化检测Vn和avβ5蛋白的表达 | 第36页 |
2.2.9 透射电镜标本的制备及观察 | 第36-37页 |
2.2.10 统计学分析 | 第37页 |
2.3 实验结果 | 第37-45页 |
2.3.1 人肝窦内皮细胞形态的观察 | 第37-38页 |
2.3.2 高糖和oxLDL对肝窦内皮细胞形态的影响 | 第38页 |
2.3.3 不同浓度葡萄糖在不同时间对肝窦内皮细胞Vn和avβ5表达的影响 | 第38页 |
2.3.4 不同浓度oxLDL在不同时间对肝窦内皮细胞Vn和avβ5表达的影响 | 第38-40页 |
2.3.5 糖尿病合并脂肪肝大鼠模型建立及肝脏病理学特点 | 第40-42页 |
2.3.6 糖尿病合并脂肪肝大鼠肝窦的超微结构特点 | 第42-43页 |
2.3.7 整合素avβ5在糖尿病性脂肪肝大鼠肝脏中的表达和分布 | 第43-45页 |
2.4 讨论 | 第45-47页 |
第三章 整合素avβ5介导高糖和oxLDL诱导的肝窦毛细血管化及其机制研究 | 第47-68页 |
3.1 实验材料 | 第47-49页 |
3.1.1 实验试剂 | 第47-48页 |
3.1.2 实验器材 | 第48页 |
3.1.3 主要液体的配制 | 第48-49页 |
3.2 实验方法 | 第49-58页 |
3.2.1 细胞转染实验 | 第49-56页 |
3.2.2 RT-PCR检测病毒转染前后肝窦内皮细胞Vn等mRNA的表达 | 第56页 |
3.2.3 WesternBlot方法检测肝窦内皮细胞Vn等蛋白表达的变化 | 第56页 |
3.2.4 细胞免疫荧光检测肝窦内皮细胞的Vn等蛋白的表达 | 第56-57页 |
3.2.5 扫描电镜观察肝窦内皮细胞窗孔形态 | 第57页 |
3.2.6 整合素avβ5抑制剂对大鼠FAK/RhoGTPase信号通路蛋白的影响 | 第57页 |
3.2.7 RT-PCR检测大鼠肝组织的αvβ5、FAK、RhoA和Rac1的mRNA结果 | 第57页 |
3.2.8 免疫组化检测各组αvβ5、FAK、RhoA和Rac1的蛋白表达 | 第57-58页 |
3.2.9 统计学分析 | 第58页 |
3.3 实验结果 | 第58-65页 |
3.3.1 高糖和oxLDL对肝窦内皮细胞窗孔的影响 | 第58页 |
3.3.2 高糖和oxLDL刺激下整合素avβ5对HLSECs窗孔的影响 | 第58-59页 |
3.3.3 整合素avβ5介导高糖和oxLDL诱导的肝窦毛细血管化 | 第59-61页 |
3.3.4 整合素αvβ5沉默后FAK、RhoA和Rac1表达 | 第61-63页 |
3.3.5 整合素avβ5抑制剂在体内对FAK/RhoGTPase信号通路蛋白表达的影响 | 第63-65页 |
3.4 讨论 | 第65-68页 |
第四章 整合素avβ5抑制剂对糖尿病性脂肪肝肝组织形态和功能的影响 | 第68-77页 |
4.1 实验材料 | 第68-69页 |
4.1.1 实验试剂 | 第68页 |
4.1.2 实验器材 | 第68页 |
4.1.3 高脂饲料 | 第68-69页 |
4.1.4 实验动物 | 第69页 |
4.1.5 主要试剂的配制 | 第69页 |
4.2 实验方法 | 第69-71页 |
4.2.1 分组及干预措施 | 第69-70页 |
4.2.2 RT-PCR检测Vn等mRNA的表达 | 第70页 |
4.2.3 Westblot检测Vn等蛋白的表达 | 第70页 |
4.2.4 血浆生化指标的检测 | 第70-71页 |
4.3 实验结果 | 第71-75页 |
4.3.1 整合素avβ5抑制剂对糖尿病性脂肪肝细胞形态的影响 | 第71-74页 |
4.3.2 整合素avβ5抑制剂对肝窦毛细血管化的影响 | 第74-75页 |
4.3.3 整合素avβ5抑制剂对糖尿病性脂肪肝大鼠肝功能的影响 | 第75页 |
4.3.4 整合素avβ5抑制剂对糖尿病脂肪肝大鼠一般资料及代谢参数的影响 | 第75页 |
4.4 讨论 | 第75-77页 |
第五章 GLP-1通过调节整合素avβ5的表达对肝窦毛细管化的影响 | 第77-86页 |
5.1 实验材料 | 第77页 |
5.1.1 实验主要试剂 | 第77页 |
5.1.2 实验主要器材 | 第77页 |
5.2 实验方法 | 第77-79页 |
5.2.1 实验动物分组及干预措施 | 第77-78页 |
5.2.2 肝窦内皮细胞的培养和分组 | 第78页 |
5.2.3 动物标本的收集及取材 | 第78页 |
5.2.4 实时荧光定量RT-PCR测整合素av、β5和VnmRNA的表达 | 第78页 |
5.2.5 Westernblot检测Vn蛋白的表达 | 第78页 |
5.2.6 免疫组化检测Vn蛋白的表达 | 第78页 |
5.2.7 免疫荧光检测Vn蛋白的表达 | 第78页 |
5.2.8 透射电镜检测体内肝组织肝窦基底膜厚度的变化 | 第78-79页 |
5.2.9 扫描电镜检测体外肝窦内皮细胞窗孔的变化 | 第79页 |
5.2.10 统计学方法 | 第79页 |
5.3 结果 | 第79-84页 |
5.3.1 GLP-1能够抑制HLSEC细胞、大鼠血清及肝组织中整合素avβ5的表达 | 第79-80页 |
5.3.2 GLP-1能够抑制整合素avβ5诱导的肝窦毛细血管化 | 第80-83页 |
5.3.3 GLP-1对糖尿病性脂肪肝大鼠肝细胞形态及功能的影响 | 第83-84页 |
5.4 讨论 | 第84-86页 |
结论 | 第86-87页 |
参考文献 | 第87-95页 |
缩略词表 | 第95-97页 |
攻读学位期间的研究成果 | 第97-98页 |
致谢 | 第98-99页 |