| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略词 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-24页 |
| 1 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 稻纵卷叶螟 | 第12-13页 |
| 1.2 昆虫海藻糖酶 | 第13-14页 |
| 1.3 RNA干扰的本质及应用 | 第14-16页 |
| 1.4 植物转基因技术及其应用 | 第16-22页 |
| 1.4.1 植物转基因技术的方法 | 第16-19页 |
| 1.4.2 植物转基因技术的运用 | 第19-22页 |
| 2 研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 2.1 研究目的 | 第22页 |
| 2.2 研究意义 | 第22-23页 |
| 3 本研究采用的技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 稻纵卷叶螟可溶型海藻糖酶基因的克隆、序列分析及表达谱 | 第24-54页 |
| 1 实验材料 | 第25-26页 |
| 1.1 供试昆虫及取样 | 第25页 |
| 1.2 主要试剂与耗材 | 第25页 |
| 1.3 主要仪器 | 第25-26页 |
| 2 实验方法 | 第26-43页 |
| 2.1 稻纵卷叶螟总RNA的抽提 | 第26页 |
| 2.2 第一链c DNA的合成 | 第26-31页 |
| 2.2.1 RT-PCR及RT-q PCR第一链c DNA合成 | 第27-28页 |
| 2.2.2 5' RACE第一链c DNA合成 | 第28-31页 |
| 2.2.3 3' RACE第一链c DNA合成 | 第31页 |
| 2.3 Cm Tre1基因片段的RT-PCR扩增 | 第31-33页 |
| 2.4 稻纵卷叶螟Cm Tre1基因末端序列的RACE扩增 | 第33-36页 |
| 2.4.1 5'RACE扩增 | 第33-35页 |
| 2.4.2 3' RACE扩增 | 第35-36页 |
| 2.5 Cm Tre1基因的RT-PCR序列验证 | 第36-40页 |
| 2.5.1 Cm Tre1的RT-PCR扩增 | 第37页 |
| 2.5.2 PCR产物的回收 | 第37-38页 |
| 2.5.3 Cm Tre1基因的克隆 | 第38-40页 |
| 2.6 稻纵卷叶螟Cm Tre1基因的生物信息学分析 | 第40页 |
| 2.7 稻纵卷叶螟Cm Tre1基因时空表达的相对RT-q PCR分析 | 第40-42页 |
| 2.8 数据统计与分析 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-52页 |
| 3.1 稻纵卷叶螟总RNA的提取 | 第43页 |
| 3.2 稻纵卷叶螟Cm Tre1基因的克隆和序列分析 | 第43-45页 |
| 3.3 Cm Tre1蛋白序列比对和进化树构建 | 第45页 |
| 3.4 Cm Tre1蛋白结构分析 | 第45-49页 |
| 3.5 Cm Tre1基因的时空表达分析 | 第49-52页 |
| 4 讨论 | 第52-54页 |
| 第三章 重组RNA干扰表达载体的构建与鉴定 | 第54-72页 |
| 1 材料 | 第54-56页 |
| 1.1 质粒、菌株 | 第54-55页 |
| 1.2 酶、试剂盒及引物 | 第55页 |
| 1.3 主要仪器 | 第55页 |
| 1.4 培养基 | 第55-56页 |
| 1.4.1 大肠杆菌培养基（LB） | 第55-56页 |
| 1.4.2 农杆菌培养基（YEB） | 第56页 |
| 2 方法 | 第56-66页 |
| 2.1 靶位点设计与合成 | 第56页 |
| 2.2 摇菌 | 第56-57页 |
| 2.3 质粒的提取 | 第57页 |
| 2.4 p UC57-Cm Tre1*和p1301质粒的酶切回收 | 第57-59页 |
| 2.4.1 p UC57-Cm Tre1*和p1301的双酶切 | 第58-59页 |
| 2.4.2 目的片段的回收 | 第59页 |
| 2.5 重组表达载体的构建 | 第59-60页 |
| 2.6 重组表达载体的筛选 | 第60-61页 |
| 2.6.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第60-61页 |
| 2.6.2 大肠杆菌的转化与筛选 | 第61页 |
| 2.7 重组表达载体的鉴定 | 第61-63页 |
| 2.7.1 PCR鉴定 | 第62页 |
| 2.7.2 双酶切检测 | 第62-63页 |
| 2.7.3 测序鉴定 | 第63页 |
| 2.8 农杆菌转化及鉴定 | 第63-66页 |
| 2.8.1 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第64页 |
| 2.8.2 重组表达载体p1301-Cm Tre1*转化根癌农杆菌 | 第64-65页 |
| 2.8.3 重组表达载体转化根癌农杆菌的PCR鉴定 | 第65-66页 |
| 3 结果与分析 | 第66-70页 |
| 3.1 重组表达载体p1301-Cm Tre1*的构建 | 第66-67页 |
| 3.1.1 p UC57-Cm Tre1*与p1301的酶切回收 | 第66页 |
| 3.1.2 目的基因片段Cm Tre1*与p1301的连接 | 第66-67页 |
| 3.2 重组表达载体p1301-Cm Tre1*的鉴定 | 第67-69页 |
| 3.2.1 p1301-Cm Tre1*的PCR鉴定 | 第67-68页 |
| 3.2.2 p1301-Cm Tre1*的双酶切鉴定 | 第68-69页 |
| 3.2.3 p1301-Cm Tre1*的测序鉴定 | 第69页 |
| 3.3 重组表达载体p1301-Cm Tre1*转化农杆菌及鉴定 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-72页 |
| 第四章 水稻的遗传转化及转基因植株的检测 | 第72-93页 |
| 1 材料 | 第72-76页 |
| 1.1 供试水稻品种及农杆菌菌种 | 第72页 |
| 1.2 主要试剂及配方 | 第72-74页 |
| 1.2.1 主要试剂 | 第72-73页 |
| 1.2.2 主要试剂配方 | 第73-74页 |
| 1.3 主要仪器 | 第74-75页 |
| 1.4 主要培养基 | 第75-76页 |
| 1.4.1 农杆菌培养基（YEB） | 第75页 |
| 1.4.2 农杆菌介导的水稻转化所用培养基 | 第75-76页 |
| 1.5 供试昆虫 | 第76页 |
| 2 方法 | 第76-85页 |
| 2.1 农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第76-78页 |
| 2.1.1 水稻成熟胚愈伤组织诱导及继代培养 | 第76-77页 |
| 2.1.2 农杆菌菌液制备 | 第77页 |
| 2.1.3 愈伤组织的浸染及共培养 | 第77页 |
| 2.1.4 脱菌 | 第77-78页 |
| 2.2 转化体的筛选 | 第78页 |
| 2.3 转基因植株再生 | 第78-79页 |
| 2.3.1 抗性愈伤组织的分化 | 第78页 |
| 2.3.2 转基因植株再生及移栽 | 第78-79页 |
| 2.4 拟转基因植株的检测 | 第79-82页 |
| 2.4.1 GUS基因表达检测 | 第79页 |
| 2.4.2 拟转基因植株的PCR检测 | 第79-81页 |
| 2.4.3 转基因植株的RT-PCR检测 | 第81-82页 |
| 2.5 转基因水稻RNA干扰效应检测 | 第82-85页 |
| 2.5.1 RT-q PCR检测 | 第82-83页 |
| 2.5.2 海藻糖酶的活性检测 | 第83-85页 |
| 3 结果与分析 | 第85-92页 |
| 3.1 转基因植株的获得 | 第85-86页 |
| 3.2 拟转基因植株的鉴定 | 第86-89页 |
| 3.2.1 GUS组织化学染色鉴定 | 第86-87页 |
| 3.2.2 转基因植株的PCR鉴定 | 第87-88页 |
| 3.2.3 转基因植株的RT-PCR鉴定 | 第88-89页 |
| 3.3 转基因水稻的RNA干扰效应检测 | 第89-92页 |
| 3.3.1 RT-q PCR检测 | 第89-90页 |
| 3.3.2 海藻糖酶的活性检测 | 第90-92页 |
| 4 讨论 | 第92-93页 |
| 第五章 结论与展望 | 第93-95页 |
| 1 结论 | 第93页 |
| 2 创新点 | 第93-94页 |
| 3 展望 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-104页 |
| 附录一 | 第104-106页 |
| 附录二 | 第106-107页 |
