摘要 | 第5-7页 |
Abstracts | 第7-10页 |
第一章 绪论 | 第13-26页 |
1.1 胶质瘤治疗的现状 | 第13-14页 |
1.2 辐射对胶质瘤的治疗能力 | 第14-15页 |
1.3 胶质瘤的治疗策略 | 第15-19页 |
1.3.1 细胞周期分布 | 第15-16页 |
1.3.2 细胞凋亡 | 第16-17页 |
1.3.3 DNA 损伤反应 | 第17-19页 |
1.4 自噬在胶质瘤抗辐射中的作用 | 第19-23页 |
1.5 本部分实验的主要内容和选题意义 | 第23-26页 |
1.5.1 本部分实验的主要内容 | 第23-24页 |
1.5.2 本部分课题的选题意义 | 第24-25页 |
1.5.3 论文研究路线图 | 第25-26页 |
第二章 材料与方法 | 第26-38页 |
2.1 实验材料 | 第26-28页 |
2.1.1 细胞株 | 第26页 |
2.1.2 引物 | 第26页 |
2.1.3 抗体及试剂 | 第26-27页 |
2.1.4 γ-射线辐射 | 第27页 |
2.1.5 细胞计数仪检测细胞直径及存活或增殖的细胞数 | 第27页 |
2.1.6 主要仪器 | 第27-28页 |
2.1.7 :shRNA 质粒的序列 | 第28页 |
2.1.8 :Q-PCR 引物序列 | 第28页 |
2.2 实验方法 | 第28-38页 |
2.2.1 细胞培养 | 第28-29页 |
2.2.2 蛋白含量的测定(Lowry’S 法) | 第29页 |
2.2.3 SDS-PAGE | 第29-30页 |
2.2.4 Western-blot 分析 | 第30页 |
2.2.5 二次免疫印迹 | 第30-31页 |
2.2.6 细胞存活率的检测 | 第31页 |
2.2.7 细胞数目及细胞直径的检测 | 第31页 |
2.2.8 细胞辐射后 Caspase3/7 及 caspase8 活性的检测 | 第31页 |
2.2.9 细胞双染的凋亡流式检测 | 第31页 |
2.2.10 细胞膜死亡受体 DR5 的流式检测 | 第31页 |
2.2.11 免疫沉淀 | 第31-32页 |
2.2.12 蛋白的胶内酶解实验 | 第32页 |
2.2.13 细胞的转染 | 第32-33页 |
2.2.14 免疫荧光共定位实验步骤 | 第33页 |
2.2.15 自噬小泡的检测 | 第33页 |
2.2.16 透射电镜样品的检测 | 第33页 |
2.2.17 原代细胞培养 | 第33-34页 |
2.2.18 提取总 RNA 并进行 Real-time PCR | 第34-36页 |
2.2.19 细胞总蛋白样品的制备 | 第36页 |
2.2.20 MTT 法 | 第36-37页 |
2.2.21 基因组学数据分析--Illumina 测序及生物信息学分析 | 第37页 |
2.2.22 统计学处理 | 第37-38页 |
第三章 结果 | 第38-93页 |
3.1 不同胶质瘤细胞辐射后基因组学研究 | 第38-65页 |
3.1.1 γ-射线辐射后不同神经胶质瘤细胞的表现特征 | 第38-41页 |
3.1.2 辐射后不同的胶质瘤细胞基因组学研究 | 第41-54页 |
3.1.3 小结:三种胶质瘤细胞辐射后基因组学数据的差别 | 第54-56页 |
3.1.4 辐射后 P53 对胶质瘤细胞转录因子调控作用 | 第56-65页 |
3.2 胶质瘤辐射后死亡受体 DR5 通过与自噬相关蛋白相互作用促进细胞的凋亡 | 第65-93页 |
3.2.1 辐射促使胶质瘤细胞发生自噬及凋亡 | 第65-67页 |
3.2.2 辐射后自噬与凋亡的关系 | 第67-77页 |
3.2.3 辐射后自噬小体的检测 | 第77-79页 |
3.2.4 DR5 复合体的组成 | 第79-81页 |
3.2.5 DR5 及 LC3 沉默基因载体的构建 | 第81-83页 |
3.2.6 病人的原代细胞对辐射后的影响 | 第83-86页 |
3.2.7 细胞自噬与 P62 蛋白的关系 | 第86-89页 |
3.2.8 不同自噬的引发剂辐射后促进细胞的凋亡发生 | 第89-93页 |
第四部分 结论 | 第93-96页 |
4.1 三种胶质瘤细胞基因组学的差异比较 | 第93页 |
4.2 P53 作为转录因子调控了三种胶质瘤细胞辐射敏感性的差异 | 第93-94页 |
4.3 辐射后自噬通过促进 caspase8 活性增加凋亡水平 | 第94-96页 |
参考文献 | 第96-107页 |
附录 | 第107-121页 |
攻读学位期间发表论文与研究成果清单 | 第121-122页 |
致谢 | 第122-123页 |