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不同胶质瘤细胞辐射后基因组学分析及自噬与凋亡相互作用分子机制研究

摘要第5-7页
Abstracts第7-10页
第一章 绪论第13-26页
    1.1 胶质瘤治疗的现状第13-14页
    1.2 辐射对胶质瘤的治疗能力第14-15页
    1.3 胶质瘤的治疗策略第15-19页
        1.3.1 细胞周期分布第15-16页
        1.3.2 细胞凋亡第16-17页
        1.3.3 DNA 损伤反应第17-19页
    1.4 自噬在胶质瘤抗辐射中的作用第19-23页
    1.5 本部分实验的主要内容和选题意义第23-26页
        1.5.1 本部分实验的主要内容第23-24页
        1.5.2 本部分课题的选题意义第24-25页
        1.5.3 论文研究路线图第25-26页
第二章 材料与方法第26-38页
    2.1 实验材料第26-28页
        2.1.1 细胞株第26页
        2.1.2 引物第26页
        2.1.3 抗体及试剂第26-27页
        2.1.4 γ-射线辐射第27页
        2.1.5 细胞计数仪检测细胞直径及存活或增殖的细胞数第27页
        2.1.6 主要仪器第27-28页
        2.1.7 :shRNA 质粒的序列第28页
        2.1.8 :Q-PCR 引物序列第28页
    2.2 实验方法第28-38页
        2.2.1 细胞培养第28-29页
        2.2.2 蛋白含量的测定(Lowry’S 法)第29页
        2.2.3 SDS-PAGE第29-30页
        2.2.4 Western-blot 分析第30页
        2.2.5 二次免疫印迹第30-31页
        2.2.6 细胞存活率的检测第31页
        2.2.7 细胞数目及细胞直径的检测第31页
        2.2.8 细胞辐射后 Caspase3/7 及 caspase8 活性的检测第31页
        2.2.9 细胞双染的凋亡流式检测第31页
        2.2.10 细胞膜死亡受体 DR5 的流式检测第31页
        2.2.11 免疫沉淀第31-32页
        2.2.12 蛋白的胶内酶解实验第32页
        2.2.13 细胞的转染第32-33页
        2.2.14 免疫荧光共定位实验步骤第33页
        2.2.15 自噬小泡的检测第33页
        2.2.16 透射电镜样品的检测第33页
        2.2.17 原代细胞培养第33-34页
        2.2.18 提取总 RNA 并进行 Real-time PCR第34-36页
        2.2.19 细胞总蛋白样品的制备第36页
        2.2.20 MTT 法第36-37页
        2.2.21 基因组学数据分析--Illumina 测序及生物信息学分析第37页
        2.2.22 统计学处理第37-38页
第三章 结果第38-93页
    3.1 不同胶质瘤细胞辐射后基因组学研究第38-65页
        3.1.1 γ-射线辐射后不同神经胶质瘤细胞的表现特征第38-41页
        3.1.2 辐射后不同的胶质瘤细胞基因组学研究第41-54页
        3.1.3 小结:三种胶质瘤细胞辐射后基因组学数据的差别第54-56页
        3.1.4 辐射后 P53 对胶质瘤细胞转录因子调控作用第56-65页
    3.2 胶质瘤辐射后死亡受体 DR5 通过与自噬相关蛋白相互作用促进细胞的凋亡第65-93页
        3.2.1 辐射促使胶质瘤细胞发生自噬及凋亡第65-67页
        3.2.2 辐射后自噬与凋亡的关系第67-77页
        3.2.3 辐射后自噬小体的检测第77-79页
        3.2.4 DR5 复合体的组成第79-81页
        3.2.5 DR5 及 LC3 沉默基因载体的构建第81-83页
        3.2.6 病人的原代细胞对辐射后的影响第83-86页
        3.2.7 细胞自噬与 P62 蛋白的关系第86-89页
        3.2.8 不同自噬的引发剂辐射后促进细胞的凋亡发生第89-93页
第四部分 结论第93-96页
    4.1 三种胶质瘤细胞基因组学的差异比较第93页
    4.2 P53 作为转录因子调控了三种胶质瘤细胞辐射敏感性的差异第93-94页
    4.3 辐射后自噬通过促进 caspase8 活性增加凋亡水平第94-96页
参考文献第96-107页
附录第107-121页
攻读学位期间发表论文与研究成果清单第121-122页
致谢第122-123页

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