| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 目录 | 第12-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-38页 |
| 1 猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究进展 | 第16-25页 |
| 1.1 病原学 | 第16-17页 |
| 1.2 病毒的基因组结构 | 第17-18页 |
| 1.3 病毒主要编码的蛋白 | 第18-20页 |
| 1.3.1 非结构蛋白 | 第18页 |
| 1.3.2 次要结构蛋白 | 第18页 |
| 1.3.3 主要结构蛋白 | 第18-20页 |
| 1.4 流行病学及危害 | 第20-21页 |
| 1.5 PRRSV 的检测与诊断 | 第21-22页 |
| 1.5.1 病毒分离 | 第21页 |
| 1.5.2 抗原检测 | 第21-22页 |
| 1.5.3 血清学检测 | 第22页 |
| 1.6 致病机制 | 第22-23页 |
| 1.7 PRRSV 免疫学研究 | 第23-25页 |
| 1.7.1 细胞免疫 | 第23页 |
| 1.7.2 体液免疫 | 第23-24页 |
| 1.7.3 细胞因子 | 第24页 |
| 1.7.4 抗体依赖性增强作用 | 第24-25页 |
| 2 PRRSV 疫苗的研究进展 | 第25-27页 |
| 2.1 灭活疫苗 | 第25-26页 |
| 2.2 弱毒疫苗 | 第26页 |
| 2.3 新型疫苗 | 第26-27页 |
| 2.3.1 活载体疫苗 | 第26页 |
| 2.3.2 核酸疫苗 | 第26-27页 |
| 2.3.3 亚单位疫苗 | 第27页 |
| 3 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 | 第27-29页 |
| 4 PCR 技术研究进展 | 第29-36页 |
| 4.1 PCR 技术的原理 | 第29-30页 |
| 4.2 PCR 技术的分类 | 第30-36页 |
| 4.2.1 多重 PCR 技术 | 第30-31页 |
| 4.2.2 荧光定量 PCR 技术 | 第31-36页 |
| 4.3 PCR 技术在动物医学方面的应用 | 第36页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第36-38页 |
| 第二章 猪繁殖与呼吸综合征病毒检测方法的建立 | 第38-56页 |
| 1 材料 | 第38-39页 |
| 1.1 毒株与样品采集 | 第38-39页 |
| 1.2 菌株与载体 | 第39页 |
| 1.3 主要试剂 | 第39页 |
| 1.4 主要仪器 | 第39页 |
| 2 荧光定量 PCR 检测方法的建立 | 第39-45页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第39-40页 |
| 2.2 PRRSV 病毒 RNA 的提取 | 第40页 |
| 2.3 RNA 浓度测定 | 第40页 |
| 2.4 cDNA 的合成 | 第40-41页 |
| 2.5 PCR 扩增 | 第41页 |
| 2.6 PCR 产物回收 | 第41-42页 |
| 2.7 重组质粒标准品的制备 | 第42-44页 |
| 2.7.1 DH5α感受态细胞的制备 | 第42页 |
| 2.7.2 目的基因与载体的连接 | 第42-43页 |
| 2.7.3 重组质粒的转化 | 第43页 |
| 2.7.4 重组质粒的提取和鉴定 | 第43-44页 |
| 2.8 重组质粒的稀释 | 第44页 |
| 2.9 PRRSV SYBR Green I 实时荧光定量 PCR 检测方法的优化 | 第44页 |
| 2.9.1 退火温度的优化 | 第44页 |
| 2.9.2 引物浓度的优化 | 第44页 |
| 2.9.3 标准曲线的建立 | 第44页 |
| 2.10 特异性试验 | 第44-45页 |
| 2.11 敏感性试验 | 第45页 |
| 2.12 重复性 | 第45页 |
| 2.13 临床样品检测 | 第45页 |
| 3 PRRSV RT PCR 检测方法的建立 | 第45-49页 |
| 3.1 引物的设计与合成 | 第45页 |
| 3.2 PRRSV cDNA PCR 扩增 | 第45-46页 |
| 3.3 PCR 产物回收 | 第46页 |
| 3.4 目的基因与载体的连接 | 第46-47页 |
| 3.5 重组质粒的转化 | 第47页 |
| 3.6 特异性试验 | 第47页 |
| 3.7 RT PCR 扩增条件的优化 | 第47-48页 |
| 3.8 敏感性试验 | 第48页 |
| 3.9 临床样品检测 | 第48-49页 |
| 4 结果 | 第49-54页 |
| 4.1 目的片段的克隆及鉴定 | 第49页 |
| 4.2 荧光定量 PCR 检测方法的优化 | 第49-50页 |
| 4.3 荧光定量 PCR 标准曲线的建立 | 第50-51页 |
| 4.4 荧光定量 PCR 特异性试验 | 第51页 |
| 4.5 荧光定量 PCR 敏感性试验 | 第51-52页 |
| 4.6 荧光定量 PCR 重复性试验 | 第52-53页 |
| 4.7 PRRSV RT PCR 特异性试验 | 第53页 |
| 4.8 PRRSV RT PCR 敏感性试验 | 第53页 |
| 4.9 样品的检测 | 第53-54页 |
| 5 讨论 | 第54-56页 |
| 第三章 华东地区部分猪场猪繁殖与呼吸综合征流行状况调查 | 第56-62页 |
| 1 材料 | 第56-57页 |
| 1.1 样品 | 第56页 |
| 1.2 毒株 | 第56页 |
| 1.3 主要试剂 | 第56页 |
| 1.4 主要仪器 | 第56-57页 |
| 2 方法 | 第57-59页 |
| 2.1 病毒 RNA 的提取 | 第57页 |
| 2.2 RNA 浓度测定 | 第57页 |
| 2.3 cDNA 的合成 | 第57-58页 |
| 2.4 PCR 扩增 | 第58页 |
| 2.5 PCR 产物回收 | 第58-59页 |
| 2.6 目的基因与载体的连接 | 第59页 |
| 2.7 重组质粒的转化 | 第59页 |
| 3 结果 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-62页 |
| 第四章 PRRSV ORF5 的遗传变异分析 | 第62-77页 |
| 1 材料 | 第62-63页 |
| 1.1 样品 | 第62页 |
| 1.2 主要试剂 | 第62页 |
| 1.3 主要仪器 | 第62-63页 |
| 2 方法 | 第63-66页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第63页 |
| 2.2 病毒 RNA 的提取 | 第63页 |
| 2.3 cDNA 第一链的合成 | 第63-64页 |
| 2.4 ORF5 的扩增 | 第64-65页 |
| 2.5 PCR 产物回收 | 第65页 |
| 2.6 目的基因与载体的连接 | 第65页 |
| 2.7 重组质粒的转化 | 第65-66页 |
| 2.8 ORF5 序列分析 | 第66页 |
| 2.9 GP5 蛋白抗原表位分析 | 第66页 |
| 3 结果 | 第66-75页 |
| 3.1 核苷酸序列比对 | 第66-69页 |
| 3.2 ORF5 基因扩增结果 | 第69页 |
| 3.3 氨基酸序列比对 | 第69-70页 |
| 3.4 同源性分析 | 第70页 |
| 3.5 系统进化树分析 | 第70-71页 |
| 3.6 GP5 蛋白抗原表位分析结果 | 第71-75页 |
| 4 讨论 | 第75-77页 |
| 第五章 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-88页 |
| 附录 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 攻读硕士学位期间已发表的论文 | 第90页 |