大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位单克隆抗体的制备及其B细胞线性表位分析
| CONTENTS | 第5-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-23页 |
| 1.1 致病性大肠杆菌概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 产志贺毒素性大肠杆菌 | 第12页 |
| 1.1.2 产肠毒素性大肠杆菌 | 第12-14页 |
| 1.2 不耐热肠毒素研究进展 | 第14-19页 |
| 1.2.1 LT的基因与分子结构 | 第14-16页 |
| 1.2.2 LT的理化特性和受体结合特性 | 第16-17页 |
| 1.2.3 LT的致病机理 | 第17页 |
| 1.2.4 LT的免疫原性 | 第17-18页 |
| 1.2.5 LT的黏膜佐剂效应 | 第18-19页 |
| 1.2.6 LT的检测方法 | 第19页 |
| 1.3 LTB研究进展 | 第19-22页 |
| 1.3.1 LTB的免疫调节作用 | 第19-20页 |
| 1.3.2 LTB作为黏膜免疫佐剂的研究 | 第20页 |
| 1.3.3 LTB单克隆抗体研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3.4 LTB抗原表位研究概况 | 第21-22页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 2 材料和方法 | 第23-35页 |
| 2.1 材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 菌株、质粒、实验动物及细胞系 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.4 PCR扩增引物 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-35页 |
| 2.2.1 重组蛋白LTB的表达及鉴定 | 第24-26页 |
| 2.2.2 多克隆抗体的制备 | 第26页 |
| 2.2.3 单克隆抗体的制备 | 第26-28页 |
| 2.2.4 单克隆抗体亚类鉴定和效价检测 | 第28-29页 |
| 2.2.5 单克隆抗体的免疫原性鉴定 | 第29页 |
| 2.2.6 单克隆抗体的特异性试验 | 第29-30页 |
| 2.2.7 单克隆抗体中和活性试验 | 第30-31页 |
| 2.2.8 LTB亚单位B细胞线性抗原表位的分析 | 第31-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-47页 |
| 3.1 重组蛋白LTB的表达及鉴定 | 第35-37页 |
| 3.1.1 重组质粒pET-30a-LTB的鉴定 | 第35页 |
| 3.1.2 重组蛋白LTB的诱导表达及纯化 | 第35-36页 |
| 3.1.3 重组蛋白LTB的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2 多克隆抗体的制备 | 第37页 |
| 3.3 单克隆抗体的制备 | 第37-38页 |
| 3.3.1 间接ELISA方法的建立 | 第37页 |
| 3.3.2 杂交瘤细胞的筛选与鉴定 | 第37-38页 |
| 3.4 单克隆抗体亚类鉴定和效价检测 | 第38-39页 |
| 3.4.1 单克隆抗体亚类鉴定 | 第38-39页 |
| 3.4.2 杂交瘤细胞上清和腹水效价检测 | 第39页 |
| 3.5 单克隆抗体的免疫原性鉴定 | 第39-40页 |
| 3.5.1 阻断ELISA | 第39页 |
| 3.5.2 Western blot鉴定 | 第39-40页 |
| 3.6 单克隆抗体的特异性试验 | 第40-41页 |
| 3.6.1 Western blot鉴定 | 第40-41页 |
| 3.6.2 阻断ELISA | 第41页 |
| 3.7 单克隆抗体中和活性试验 | 第41-43页 |
| 3.7.1 LT对Y1细胞的毒性试验 | 第41-42页 |
| 3.7.2 LT对Y1细胞半数致死量的测定 | 第42页 |
| 3.7.3 单克隆抗体中和滴度的测定 | 第42-43页 |
| 3.8 LT B亚单位B细胞线性抗原表位的分析 | 第43-47页 |
| 3.8.1 eltB基因分段克隆 | 第43页 |
| 3.8.2 重组质粒的构建与鉴定 | 第43页 |
| 3.8.3 重组短肽的表达 | 第43-44页 |
| 3.8.4 重组短肽的鉴定 | 第44-45页 |
| 3.8.5 LT B亚单位B细胞线性抗原表位分析 | 第45页 |
| 3.8.6 单克隆抗体识别的抗原表位分析 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 4.1 免疫原的制备 | 第47页 |
| 4.2 杂交瘤细胞株建立与筛选 | 第47-48页 |
| 4.3 杂交瘤细胞的克隆 | 第48页 |
| 4.4 单克隆抗体的应用 | 第48-49页 |
| 4.5 抗原表位的分析 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第59页 |
