| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第11-15页 |
| 2 实验材料与方法 | 第15-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第15页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第15页 |
| 2.1.2 组织标本 | 第15页 |
| 2.2 实验试剂 | 第15-23页 |
| 2.2.1 SD 大鼠子宫肌瘤模型建立所用试剂 | 第15页 |
| 2.2.2 细胞培养及转染、荧光素酶检测试剂和相关溶液配制 | 第15-16页 |
| 2.2.3 免疫组化法相关试剂及相关溶液配制 | 第16-17页 |
| 2.2.4 免疫荧光法相关试剂及相关溶液配制 | 第17页 |
| 2.2.5 石蜡包埋组织、切片及 HE 染色相关试剂及相关溶液配制 | 第17-18页 |
| 2.2.6 WESTERN BLOTING 法相关试剂及相关溶液配制 | 第18-20页 |
| 2.2.7 质粒制备试剂与相关溶液配制 | 第20-22页 |
| 2.2.8 RT-PCR 法相关试剂及相关溶液配制 | 第22-23页 |
| 2.3 仪器 | 第23-24页 |
| 2.4 实验方法 | 第24-34页 |
| 2.4.1 负荷剂量雌孕激素法造模 | 第24页 |
| 2.4.2 检测指标及方法 | 第24-25页 |
| 2.4.3 石蜡包埋 | 第25页 |
| 2.4.4 HE 染色 | 第25-26页 |
| 2.4.5 免疫组织化学方法检测组织中 MYOCARDIN，ERΑ，PCNA 蛋白在正常子宫肌组织和子宫肌瘤中的原位表达 | 第26页 |
| 2.4.6 细胞爬片免疫荧光基本步骤 | 第26页 |
| 2.4.7 RT-PCR 法检测 MYOCADIN，ERΑ在转录水平的表达 | 第26-29页 |
| 2.4.8 WESTERN BLOTING 法检测 MYOCADIN，ERΑ，SM22, Α-ACTIN，PCNA 在蛋白水平的表达 | 第29-30页 |
| 2.4.9 质粒中量提取 | 第30-31页 |
| 2.4.10 COS-7 细胞培养 | 第31-32页 |
| 2.4.11 原代细胞培养 | 第32页 |
| 2.4.12 细胞转染、荧光素酶活性检测 | 第32-33页 |
| 2.4.13 统计学处理 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-61页 |
| 3.1 肉眼观 SD 大鼠实验组和对照组子宫形态 | 第34页 |
| 3.2 子宫重量与子宫系数 | 第34-35页 |
| 3.3 HE 染色检测 SD 大鼠子宫平滑肌病理改变 | 第35-36页 |
| 3.4 细胞形态学鉴定 | 第36-37页 |
| 3.4.1 免疫组化检测正常子宫平滑肌细胞和子宫肌瘤细胞的形态 | 第36-37页 |
| 3.4.2 免疫荧光检测正常的子宫平滑肌细胞和子宫肌瘤细胞形态 | 第37页 |
| 3.5 MYOCARDIN 促进子宫平滑肌细胞标志基因的分化和表达 | 第37-47页 |
| 3.5.1 SD 大鼠子宫肌瘤模型建立后 RT-PCR 检测正常子宫平滑肌组织与子宫肌瘤组织中 MYOCARDIN、SM22Α的表达 | 第37-38页 |
| 3.5.2 SD 大鼠子宫肌瘤模型建立后 WESTERN BLOTING 在蛋白水平检测正常子宫平滑肌组织与子宫肌瘤组织中 MYOCARDIN、SM22Α、A-ACTIN 的表 达 | 第38-40页 |
| 3.5.3 SD 大鼠子宫肌瘤模型建立后免疫组织化学检测正常子宫平滑肌组织与子宫肌瘤组织中 MYOCARDIN、SM22Α的表达 | 第40-41页 |
| 3.5.4 MYOCARDIN 在原代 USMC(正常子宫平滑肌细胞和子宫肌瘤细胞)中诱导平滑肌细胞分化标志基因 SM22Α启动子的转录激活 | 第41-42页 |
| 3.5.5 在原代 USMC( 正常子宫平滑肌细胞和子宫肌瘤细胞 ) 中检测MYOCARDIN 诱导的突变了 ERE 的平滑肌细胞分化标志基因 SM22Α启动子的转录活性 | 第42-43页 |
| 3.5.6 在原代 USMC( 正常子宫平滑肌细胞和子宫肌瘤细胞 ) 中检测MYOCARDIN 诱导的突变了两个 CARG-BOX 的平滑肌细胞分化标志基因 SM22Α启动子的转录活性 | 第43-44页 |
| 3.5.7 原代子宫肌瘤细胞中转染 MYOCARDIN 后 WB 结果 | 第44-45页 |
| 3.5.8 原代子宫肌瘤细胞中转染 MYOCARDIN 后 RT-PCR 结果 | 第45-46页 |
| 3.5.9 原代子宫平滑肌细胞和原代子宫肌瘤细胞中转染表达质粒 MYOCARDIN 后的免疫荧光结果 | 第46-47页 |
| 3.6 ERΑ促进子宫平滑肌细胞的增殖表达 | 第47-52页 |
| 3.6.1 SD 大鼠子宫肌瘤模型建立后，RT-PCR 在 MRNA 水平检测正常子宫平滑肌组织与子宫肌瘤组织中 ERΑ、PCNA 的表达 | 第47-48页 |
| 3.6.2 SD 大鼠子宫肌瘤模型建立后，WESTERN BLOTING 在蛋白水平检测正常子宫肌组织与子宫肌瘤组织中 ERΑ、PCNA 的表达 | 第48-49页 |
| 3.6.3 免疫组织化学检测正常子宫肌组织与子宫肌瘤组织中 ERΑ、PCNA 的表达 | 第49-50页 |
| 3.6.4 ERΑ促进平滑肌增值 MARKER 的表达，原代正常子宫平滑肌细胞中转染 ERΑ后的 WB 结果 | 第50-51页 |
| 3.6.5 原代正常子宫平滑肌细胞中转染 ERA 后的免疫荧光结果 | 第51-52页 |
| 3.7 ERΑ抑制 MYOCARDIN 自身的转录激活和表达 | 第52-55页 |
| 3.7.1 COS-7 细胞中 ERΑ抑制 MYOCARDIN 的自身转录表达并且其抑制作用与 ERΑ的浓度正相关 | 第52-53页 |
| 3.7.2 ERΑ抑制 MYOCARDIN 的表达，原代正常子宫平滑肌细胞中转染 ERΑ后的 WB 和 RT-PCR 结果 | 第53-54页 |
| 3.7.3 USMC 中 ERΑ抑制 MYOCARDIN 的表达，原代正常子宫平滑肌细胞中转染 ERΑ后的免疫荧光结果 | 第54-55页 |
| 3.8 ERΑ抑制 MYOCARDIN 诱导的转录和表达 | 第55-61页 |
| 3.8.1 USMC 中 ERΑ抑制 MYOCARDIN 诱导的 SM22 LUCIFEREASE 的转录活性 | 第55-56页 |
| 3.8.2 USMC（对照组 SD 大鼠正常的子宫平滑肌细胞和实验组 SD 大鼠子宫肌瘤细胞）中 ERΑ抑制 MYOCARDIN 诱导的 SM22EMUT LUCIFEREASE 的活性 | 第56-57页 |
| 3.8.3 USMC（对照组 SD 大鼠正常的子宫平滑肌细胞和实验组 SD 大鼠子宫肌瘤细胞）中 ERΑ抑制 MYOCARDIN 诱导的 SM22MUT LUCIFEREASE 的活性 | 第57-58页 |
| 3.8.4 ERΑ抑制 MYOCARDIN 诱导的子宫平滑肌细胞的分化表达，原代子宫肌瘤细胞中转染 ERΑ和/或 MYOCARDIN 后的 RT-PCR 结果 | 第58-60页 |
| 3.8.5 ERΑ抑制 MYOCARDIN 诱导的子宫平滑肌细胞的分化表达，正常子宫平滑肌细胞中转染 MYOCARDIN 和/或 ERΑ后的 WB 结果 | 第60-61页 |
| 3.9 ERΑ和 MYOCARDIN 的相互作用 | 第61页 |
| 4 讨论 | 第61-64页 |
| 5 结论 | 第64-65页 |
| 6 展望 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-71页 |
| 附录1 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第71页 |
