| 图表索引 | 第5-6页 |
| 中英文缩略词对照 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9页 |
| 前言 | 第10-14页 |
| 材料与方法 | 第14-49页 |
| 实验材料 | 第14-20页 |
| 1.1 常用仪器设备 | 第14-15页 |
| 1.2 常用试剂 | 第15-20页 |
| 1.2.1 主要试剂盒 | 第15-16页 |
| 1.2.2 实验常用试剂 | 第16-17页 |
| 1.2.3 常用抗体 | 第17-18页 |
| 1.2.4 常用菌株、载体 | 第18页 |
| 1.2.5 实验动物 | 第18页 |
| 1.2.6 常用细胞株 | 第18页 |
| 1.2.7 PCR、反转录PCR和Real-Time PCR所用引物 | 第18-20页 |
| 实验方法 | 第20-29页 |
| 2.1 细胞RNA的提取 | 第20页 |
| 2.2 RT-PCR | 第20页 |
| 2.3 PCR扩增目的片段 | 第20-21页 |
| 2.4 重组质粒的构建 | 第21-22页 |
| 2.5 小鼠肾脏上皮细胞系及其培养 | 第22-23页 |
| 2.6 贴壁细胞总蛋白的提取 | 第23页 |
| 2.7 哺乳动物细胞的转染 | 第23-24页 |
| 2.8 Western blot | 第24页 |
| 2.9 GST融合蛋白的表达纯化 | 第24-25页 |
| 2.10 多克隆抗体的制备 | 第25页 |
| 2.11 间接ELISA法监测抗体效价 | 第25-26页 |
| 2.12 细胞爬片间接免疫荧光染色 | 第26页 |
| 2.13 组织固定及石蜡切片 | 第26-27页 |
| 2.14 免疫组织化学染色 | 第27页 |
| 2.15 多克隆抗体的纯化 | 第27-28页 |
| 2.16 Real-Time PCR | 第28页 |
| 2.17 Real-Time PCR的数据的统计和分析 | 第28-29页 |
| 常用溶液的配制 | 第29-32页 |
| 3.1 Western-Blot相关试剂 | 第29页 |
| 3.2 细胞裂解溶液 | 第29-30页 |
| 3.3 细胞固定相关溶液 | 第30页 |
| 3.4 细胞培养相关溶液 | 第30页 |
| 3.5 细菌培养相关溶液 | 第30页 |
| 3.6 免疫组织化学相关溶液 | 第30-31页 |
| 3.7 抗体纯化所需的溶液 | 第31页 |
| 3.8 其他溶液 | 第31-32页 |
| 实验结果 | 第32-49页 |
| 一、PKD1基因的克隆与Pkd1过表达稳定细胞系的建立 | 第32-36页 |
| 1. 全长小鼠Pkd1开放读码框架(ORF)及其真核表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 2. 小鼠PC1蛋白胞外抗原区段的选择、PCR扩增及原核表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 3. 包含PC1蛋白胞外抗原区段的真核表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 4. Pkdl过表达IMCD稳定细胞系的建立 | 第35-36页 |
| 二、兔抗小鼠PC1蛋白氨基端多克隆抗体的制备及其特性分析 | 第36-41页 |
| 1. GST-mPkd1-N融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达和纯化 | 第36-38页 |
| 2. 免疫血清的制备 | 第38页 |
| 3. 小鼠PC1氨基端兔多抗血清的特异性鉴定 | 第38-40页 |
| 4. 间接免疫荧光法鉴定兔抗小鼠PC1氨基端多克隆抗体特异性 | 第40页 |
| 5. 检测PC1蛋白在野生型小鼠肾脏组织中的表达 | 第40-41页 |
| 三、PC2的缺失下调PC1蛋白的表达 | 第41-49页 |
| 1. Pkdl基因突变肾集合管细胞系的建立和特征分析 | 第42-44页 |
| 2. PC2调节经典Wnt信号通路需要PC1蛋白的表达 | 第44-46页 |
| 3. PC2的缺失在体内和体外下调PC1蛋白的表达 | 第46-49页 |
| 讨论 | 第49-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 文献综述 | 第57-66页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 基金资助 | 第67-68页 |
| 硕士在读期间发表文章 | 第68-69页 |
