| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 缩略语索引 | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-17页 |
| 1.1 蛋白质组学深度覆盖的研究背景及意义 | 第11-15页 |
| 1.1.1 蛋白质组学深度覆盖的研究概况 | 第11-12页 |
| 1.1.2 亲和富集方法及应用 | 第12-14页 |
| 1.1.3 RNA 与蛋白质相互作用简介 | 第14-15页 |
| 1.2 本论文研究的主要内容及意义 | 第15-17页 |
| 第2章 基于内源性mRNA文库的广谱亲和试剂的发展及在小鼠肝脏低丰度蛋白富集与鉴定中的应用 | 第17-31页 |
| 2.0 仪器和试剂 | 第17-18页 |
| 2.1 溶液配制 | 第18页 |
| 2.2 样本制备 | 第18-20页 |
| 2.2.1 C57BL/6J 小鼠肝脏核蛋白的制备 | 第18-19页 |
| 2.2.2 鼠肝 mRNA 的提取 | 第19-20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-21页 |
| 2.3.1 基于 mRNA 低丰度蛋白质规模化富集方法的建立 | 第20页 |
| 2.3.2 富集样品酶解及脱盐 | 第20页 |
| 2.3.3 高 pH 反相色谱预分离 | 第20-21页 |
| 2.3.4 液相色谱质谱联用条件 | 第21页 |
| 2.3.5 数据库检索条件 | 第21页 |
| 2.3.6 生物信息学分析 | 第21页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第21-29页 |
| 2.4.1 直接质谱鉴定 | 第22-25页 |
| 2.4.2 高 pH 反相色谱分离后质谱鉴定 | 第25-29页 |
| 2.5 本章小结 | 第29-31页 |
| 第3章 基于外源性 RNA 适配体的低丰度目标蛋白质富集方法及数据库的建立 | 第31-45页 |
| 3.1 仪器和试剂 | 第31页 |
| 3.2 样本制备 | 第31-32页 |
| 3.2.1 鼠肝核蛋白的提取(同 2.2.1) | 第31页 |
| 3.2.2 扩增并提取含目的基因的质粒 | 第31页 |
| 3.2.3 PCR 质粒扩增目的基因片段 | 第31-32页 |
| 3.2.4 利用体外转录技术获取外源性 RNA 适配体 | 第32页 |
| 3.3 实验方法 | 第32-33页 |
| 3.3.1 利用外源性 RNA 适配体对小鼠肝脏低丰度蛋白进行富集 | 第32页 |
| 3.3.2 富集样品酶解及脱盐 | 第32页 |
| 3.3.3 液相色谱质谱联用条件 | 第32-33页 |
| 3.3.4 数据搜库条件 | 第33页 |
| 3.3.5 聚丙烯酰胺电泳分离 | 第33页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第33-43页 |
| 3.4.1 体外转录 RNA 适配体的序列正确性评价 | 第37-39页 |
| 3.4.2 RNA 适配体固定条件的优化 | 第39-40页 |
| 3.4.3 外源性 RNA 适配体对低丰度蛋白富集效果考察 | 第40-41页 |
| 3.4.4 13 条外源性 RNA 适配体富集鉴定低丰度蛋白分析 | 第41-42页 |
| 3.4.5 鼠肝低丰度蛋白质及其对应 RNA 适配体数据库的初步构建 | 第42-43页 |
| 3.5 本章小结 | 第43-45页 |
| 结论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 附录 | 第53-77页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的学术论文 | 第77-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
