| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一部分 前言 | 第7-15页 |
| 1 bFGF 促进肿瘤血管生成 | 第7-8页 |
| 2 bFGF 参与肿瘤的发生发展 | 第8-10页 |
| 2.1 bFGF/FGFR 信号转导途径及其与肿瘤的发生发展 | 第8-9页 |
| 2.2 bFGF 与乳腺癌 | 第9-10页 |
| 3 小分子抗体 | 第10-11页 |
| 4 毕赤酵母表达系统 | 第11-12页 |
| 5 研究目的及意义 | 第12-14页 |
| 6 技术路线 | 第14-15页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第15-35页 |
| 1 实验材料 | 第15-18页 |
| 1.1 菌株、质粒及细胞株 | 第15页 |
| 1.2 主要试剂及耗材 | 第15页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第15-17页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 2 实验方法 | 第18-35页 |
| 2.1 人源性抗 bFGF ds-Diabody 基因的扩增及克隆载体的构建 | 第18-22页 |
| 2.2 酵母重组表达载体 pPICZαA-ds-Diabody 的构建 | 第22-23页 |
| 2.3 重组质粒转化毕赤酵母及高拷贝转化子的加压筛选 | 第23-25页 |
| 2.4 ds-Diabody 酵母工程菌的诱导表达及鉴定 | 第25-27页 |
| 2.5 抗体 ds-Diabody 的大量表达及纯化 | 第27-29页 |
| 2.6 ds-Diabody 与抗原 bFGF 结合活性的 ELISA 检测 | 第29-30页 |
| 2.7 ds-Diabody 的稳定性检测 | 第30页 |
| 2.8 肿瘤细胞增殖抑制实验 | 第30-31页 |
| 2.9 肿瘤细胞划痕修复实验 | 第31页 |
| 2.10 肿瘤细胞侵袭实验 | 第31-32页 |
| 2.11 HUVECs 体外成管实验 | 第32页 |
| 2.12 HUVECs 迁移实验 | 第32-33页 |
| 2.13 ds-Diabody 对 bFGF 信号通路的影响 | 第33-35页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第35-46页 |
| 3.1 抗 bFGF ds-Diabody 基因的克隆及酵母表达载体构建 | 第35页 |
| 3.2 重组酵母的筛选、表达优化及鉴定 | 第35-37页 |
| 3.2.1 高拷贝转化子的筛选鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2.2 重组酵母的表达条件优化 | 第36-37页 |
| 3.3 酵母表达产物的纯化鉴定 | 第37-38页 |
| 3.4 ds-Diabody 的浓度测定 | 第38页 |
| 3.5 ds-Diabody 与 bFGF 的结合活性及稳定性 | 第38-40页 |
| 3.6 ds-Diabody 对肿瘤细胞增殖的抑制作用 | 第40-41页 |
| 3.7 ds-Diabody 对 MCF-7 细胞迁移的抑制作用 | 第41-42页 |
| 3.8 ds-Diabody 对 MCF-7 细胞侵袭的抑制作用 | 第42页 |
| 3.9 ds-Diabody 对 HUVECs 细胞成管的抑制作用 | 第42-43页 |
| 3.10 ds-Diabody 对 HUVECs 细胞迁移的抑制作用 | 第43-44页 |
| 3.11 ds-Diabody 对 PI3K/Akt 和 MAPK/ERK 信号通路的抑制作用 | 第44-46页 |
| 第四部分 讨论与结论 | 第46-48页 |
| 第五部分 小结与展望 | 第48-49页 |
| 1 小结 | 第48页 |
| 2 展望 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 中英文缩略词 | 第53-55页 |
| 附录 | 第55-57页 |
| 硕士期间发表论文情况 | 第55页 |
| 硕士期间参加学术活动 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
