| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 中英文缩略词表(按字母顺序排列) | 第11-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-25页 |
| 1.1 天然免疫概述 | 第12-20页 |
| 1.1.1 Toll样受体 | 第12-13页 |
| 1.1.2 RLRs受体 | 第13-14页 |
| 1.1.3 NOD样受体 | 第14-15页 |
| 1.1.4 DNA受体 | 第15-17页 |
| 1.1.5 其他的PRRs | 第17页 |
| 1.1.6 干扰素转录激活机制 | 第17-19页 |
| 1.1.7 病毒抑制I型干扰素转录机制 | 第19-20页 |
| 1.2 PCV2研究进展 | 第20-23页 |
| 1.2.1 圆环病毒概述 | 第20-21页 |
| 1.2.2 PCV2基因组结构和功能 | 第21页 |
| 1.2.3 病毒入侵的过程 | 第21-22页 |
| 1.2.4 PCV2与免疫抑制研究进展 | 第22页 |
| 1.2.5 病毒基因组与宿主细胞之间的互作 | 第22-23页 |
| 1.2.6 PCV2对细胞内信号通路的作用 | 第23页 |
| 1.3 研究的主要内容及意义 | 第23-25页 |
| 第2章 PCV2体外感染对天然免疫的影响 | 第25-43页 |
| 2.1 引言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.2.1 毒株及总RNA提取试剂 | 第26页 |
| 2.2.2 PCV2基因组DNA提取溶液及其配制 | 第26-27页 |
| 2.2.3 PCV2检测引物 | 第27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-32页 |
| 2.3.1 常见细胞培养、冻存及复苏 | 第27-28页 |
| 2.3.2 PK-15细胞接毒 | 第28-29页 |
| 2.3.3 病毒TCID50的测定 | 第29页 |
| 2.3.4 PCV2 DNA模板的制备 | 第29页 |
| 2.3.5 相对荧光定量PCR检测PCV2相对含量 | 第29页 |
| 2.3.6 总RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.3.7 RNA的反转录 | 第30页 |
| 2.3.8 荧光素酶报告检测系统 | 第30-32页 |
| 2.3.9 统计学分析方法 | 第32页 |
| 2.4 实验结果 | 第32-40页 |
| 2.4.1 PCV2在PK-15细胞上的增殖规律 | 第32-33页 |
| 2.4.2 PCV2体外感染对天然免疫的影响 | 第33-40页 |
| 2.5 讨论 | 第40-42页 |
| 2.5.1 PCV2复制与宿主细胞 | 第40-41页 |
| 2.5.2 PCV2逃逸天然免疫分子机制 | 第41-42页 |
| 2.6 小结 | 第42-43页 |
| 第3章 PCV2关键蛋白对天然免疫的调控 | 第43-69页 |
| 3.1 引言 | 第43页 |
| 3.2 实验材料 | 第43-46页 |
| 3.2.1 常规化学试剂 | 第43-44页 |
| 3.2.2 分子克隆相关试剂 | 第44页 |
| 3.2.3 免疫印迹相关试剂 | 第44页 |
| 3.2.4 质粒、载体、细胞株及病毒 | 第44页 |
| 3.2.5 基因扩增引物 | 第44-45页 |
| 3.2.6 主要实验仪器 | 第45页 |
| 3.2.7 主要试剂的配制 | 第45-46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-56页 |
| 3.3.1 基因的扩增 | 第46-47页 |
| 3.3.2 PCV2目的基因片段与pcDNA3.1载体的双酶切 | 第47-48页 |
| 3.3.3 PCV2目的基因片段与pcDNA3.1载体连接 | 第48-49页 |
| 3.3.4 连接产物的转化与阳性克隆的鉴定 | 第49页 |
| 3.3.5 碱裂解法重组质粒的小提取 | 第49-50页 |
| 3.3.6 去内毒素质粒大提 | 第50-51页 |
| 3.3.7 细胞转染 | 第51-52页 |
| 3.3.8 仙台病毒培养 | 第52页 |
| 3.3.9 免疫印迹实验 | 第52-56页 |
| 3.4 实验结果 | 第56-67页 |
| 3.4.1 PCV2 ORF1,ORF2,ORF3基因的扩增及表达 | 第56-57页 |
| 3.4.2 PCV2对IFN-β有调控作用蛋白的确定 | 第57-59页 |
| 3.4.3 过表达ORF1、ORF2对天然免疫的影响 | 第59-60页 |
| 3.4.4 ORF1、ORF2对IFN-β基因转录因子活性的影响 | 第60-64页 |
| 3.4.5 ORF1、ORF2对IFN-β的调控作用发生在IRF3上游 | 第64-67页 |
| 3.5 讨论 | 第67-68页 |
| 3.5.1 ORF1/ORF2调控天然免疫 | 第67页 |
| 3.5.2 ORF1/ORF2调控IFN-β的分子机制 | 第67-68页 |
| 3.6 小结 | 第68-69页 |
| 第4章 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 附录 | 第79-80页 |
| 发表论文及参加科研情况 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
