| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第12-31页 |
| 1.1 乙醇的工业生产 | 第12-14页 |
| 1.1.1 乙烯水合法 | 第12页 |
| 1.1.2 发酵法 | 第12-14页 |
| 1.2 木质纤维素发酵生产乙醇的研究进展 | 第14-21页 |
| 1.2.1 木质纤维素简介 | 第14页 |
| 1.2.2 木质纤维素预处理 | 第14-15页 |
| 1.2.3 水解工艺 | 第15-16页 |
| 1.2.4 发酵工艺 | 第16-19页 |
| 1.2.5 纤维素为原料发酵产乙醇所用的微生物 | 第19页 |
| 1.2.6 主要研究方向 | 第19-21页 |
| 1.3 戊糖发酵产乙醇 | 第21-25页 |
| 1.3.1 酵母中戊糖的发酵机理 | 第21页 |
| 1.3.2 大肠杆菌中的戊糖发酵研究 | 第21-25页 |
| 1.4 基因合成 | 第25-29页 |
| 1.4.1 基因合成发展历程 | 第25-26页 |
| 1.4.2 亚磷酸三酯法合成寡核苷酸 | 第26-27页 |
| 1.4.3 PCR 技术的发展历程 | 第27-28页 |
| 1.4.4 重叠延伸 PCR 拼接 DNA | 第28-29页 |
| 1.4.5 双重不对称 PCR 拼接寡核苷酸 | 第29页 |
| 1.5 本论文的主要研究内容 | 第29-31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-43页 |
| 2.1 实验中用到的试剂 | 第31-32页 |
| 2.2 实验中用到的仪器 | 第32页 |
| 2.3 基因合成 | 第32-34页 |
| 2.3.1 化学合成单链寡核苷酸的溶解 | 第32页 |
| 2.3.2 DA-PCR 反应 | 第32-33页 |
| 2.3.3 OE-PCR 反应 | 第33-34页 |
| 2.4 测序亚克隆载体的构建 | 第34-38页 |
| 2.4.1 pUC18 质粒提取 | 第34-35页 |
| 2.4.2 双酶切反应 | 第35页 |
| 2.4.3 测序亚克隆重组载体 pUC-dan 连接反应 | 第35-36页 |
| 2.4.4 测序亚克隆重组载体的热激转化 | 第36-37页 |
| 2.4.5 测序亚克隆重组载体的 PCR 鉴定 | 第37页 |
| 2.4.6 合成基因的序列测定 | 第37-38页 |
| 2.5 重组载体 PET-AP 的构建 | 第38-40页 |
| 2.5.1 pUC-adh、pUC-pdc、pET-32a 质粒的提取 | 第38页 |
| 2.5.2 pUC-adh、pET-32a 的双酶切 | 第38页 |
| 2.5.3 表达重组载体 pET-adh 的构建 | 第38页 |
| 2.5.4 E.coli JM109 感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| 2.5.5 电击转化 | 第39页 |
| 2.5.6 涂板培养 | 第39页 |
| 2.5.7 克隆载体 pET-adh 质粒提取 | 第39页 |
| 2.5.8 pUC-pdc、pET-adh 的双酶切 | 第39-40页 |
| 2.5.9 克隆重组载体 pET-AP 的构建 | 第40页 |
| 2.5.10 E.coli BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第40页 |
| 2.5.11 转化子筛选及菌种保存 | 第40页 |
| 2.5.12 克隆载体 pET-AP II 质粒提取 | 第40页 |
| 2.5.13 重组质粒 pET-AP II 的测序 | 第40页 |
| 2.6 重组载体 PET-AP 的诱导表达 | 第40-41页 |
| 2.7 戊糖己糖利用情况 | 第41页 |
| 2.7.1 培养基 | 第41页 |
| 2.7.2 发酵试验 | 第41页 |
| 2.7.3 检测方法 | 第41页 |
| 2.8 发酵条件对乙醇产率的影响 | 第41-43页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第43-72页 |
| 3.1 乙醇脱氢酶基因合成 | 第43-53页 |
| 3.1.1 乙醇脱氢酶的氨基酸序列 | 第43页 |
| 3.1.2 密码子优化后 ADH II 基因序列 | 第43-44页 |
| 3.1.3 拟添加的 phoA 启动子 | 第44页 |
| 3.1.4 拟合成序列全长 | 第44-45页 |
| 3.1.5 序列拆分 | 第45-46页 |
| 3.1.6 DA-PCR 合成结果 | 第46-47页 |
| 3.1.7 OE-PCR 合成结果 | 第47页 |
| 3.1.8 测序亚克隆重组载体的 PCR 鉴定 | 第47-48页 |
| 3.1.9 测序结果 | 第48-53页 |
| 3.2 丙酮酸脱羧酶基因合成 | 第53-64页 |
| 3.2.1 PDC 氨基酸序列 | 第53页 |
| 3.2.2 密码子优化后 PDC 基因序列 | 第53-54页 |
| 3.2.3 末端修饰后拟合成序列 | 第54-55页 |
| 3.2.4 序列拆分 | 第55-56页 |
| 3.2.5 DA-PCR 合成结果 | 第56-57页 |
| 3.2.6 OE-PCR 合成结果 | 第57-58页 |
| 3.2.7 测序亚克隆重组载体的 PCR 鉴定 | 第58-59页 |
| 3.2.8 测序结果 | 第59-64页 |
| 3.3 重组载体 PET-AP 的构建 | 第64页 |
| 3.4 重组载体 PET-AP 的诱导表达 | 第64-66页 |
| 3.4.1 adh 的表达情况 | 第65页 |
| 3.4.2 pdc 的表达情况 | 第65-66页 |
| 3.5 戊糖己糖利用情况 | 第66页 |
| 3.6 发酵条件对乙醇产率的影响 | 第66-72页 |
| 3.6.1 PDC 和 ADH II 酶活曲线 | 第66-67页 |
| 3.6.2 葡萄糖发酵产乙醇曲线 | 第67-68页 |
| 3.6.3 木糖发酵产乙醇曲线 | 第68-69页 |
| 3.6.4 玉米秸秆酶解液发酵产乙醇曲线 | 第69页 |
| 3.6.5 初始 pH 对乙醇产量影响 | 第69-70页 |
| 3.6.6 温度对乙醇产量影响 | 第70页 |
| 3.6.7 通气量对乙醇产量影响 | 第70-71页 |
| 3.6.8 转速对乙醇产量影响 | 第71页 |
| 3.6.9 最优条件乙醇产率 | 第71-72页 |
| 第四章 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
