| 目录 | 第4-7页 |
| CONTENTS | 第7-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 表观遗传学 | 第12-15页 |
| 1.1.1 DNA甲基化 | 第12页 |
| 1.1.2 组蛋白修饰 | 第12-14页 |
| 1.1.3 非编码RNA调控 | 第14-15页 |
| 1.1.3.1 miRNA | 第14页 |
| 1.1.3.2 siRNA | 第14-15页 |
| 1.1.3.3 piRNA | 第15页 |
| 1.1.3.4 lincRNA | 第15页 |
| 1.2 Wnt/β-catenin信号通路 | 第15-18页 |
| 1.2.1 wnt信号通路的组成及作用 | 第15-18页 |
| 1.2.1.1 Wnt蛋白 | 第16页 |
| 1.2.1.2 卷曲蛋白(Frizzleds,FZDs) | 第16-17页 |
| 1.2.1.3 结肠腺瘤样息肉病蛋白(APC) | 第17页 |
| 1.2.1.4 糖原合成酶激酶3p(GSK-3β) | 第17页 |
| 1.2.1.5 轴蛋白(Axin) | 第17页 |
| 1.2.1.6 β-连环蛋白(β-catenin) | 第17页 |
| 1.2.1.7 T细胞转录因子/淋巴样增强因子(TCF/LEF) | 第17-18页 |
| 1.2.2 Wnt信号通路的靶基因 | 第18页 |
| 1.2.2.1 c-Myc | 第18页 |
| 1.2.2.2 CyclinD1 | 第18页 |
| 1.2.2.3 环氧合酶-2(COX-2) | 第18页 |
| 1.2.2.4 基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteninase,MMPs) | 第18页 |
| 1.3 细胞周期调控 | 第18-23页 |
| 1.3.1 细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK) | 第19-20页 |
| 1.3.2 细胞周期蛋白(cyclins) | 第20-21页 |
| 1.3.2.1 CyclinD | 第20页 |
| 1.3.2.2 CyclinE | 第20页 |
| 1.3.2.3 CyclinA | 第20-21页 |
| 1.3.2.4 CyclinB1 | 第21页 |
| 1.3.3 CKI | 第21-23页 |
| 1.3.3.1 p16 | 第21-22页 |
| 1.3.3.2 p21 | 第22页 |
| 1.3.3.3 p27 | 第22-23页 |
| 1.4 JMJD2A概述 | 第23-24页 |
| 1.4.1 JMJD2A与肿瘤 | 第23页 |
| 1.4.2 JMJD2A的细胞生物学功能 | 第23-24页 |
| 1.5 本文立题背景,内容和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-39页 |
| 2.1 材料 | 第26-28页 |
| 2.1.2 菌株 | 第26页 |
| 2.1.3 细胞 | 第26页 |
| 2.1.4 质粒 | 第26页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.6 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2.2 DNA相关实验及方法 | 第28-32页 |
| 2.2.1 大肠杆菌感受态的制备 | 第28页 |
| 2.2.2 质粒DNA的转化 | 第28-29页 |
| 2.2.3 质粒DNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.3.1 煮沸法小量提取质粒DNA | 第29页 |
| 2.2.3.2 中量提取质粒DNA(Qiagen-tip 100) | 第29-30页 |
| 2.2.4 质粒DNA的酶切处理 | 第30页 |
| 2.2.5 质粒DNA片段的纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.5.1 琼脂糖电泳分离质粒DNA | 第30页 |
| 2.2.5.2 DNA的胶回收 | 第30-31页 |
| 2.2.6 DNA连接反应 | 第31页 |
| 2.2.7 慢病毒RNAi质粒shJMJD2A的构建 | 第31-32页 |
| 2.3 RNA相关实验及方法 | 第32-33页 |
| 2.3.1 RNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.2 cDNA的合成 | 第33页 |
| 2.3.3 实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT PCR) | 第33页 |
| 2.4 蛋白相关实验及方法 | 第33-36页 |
| 2.4.1 蛋白质样品的制备 | 第33-34页 |
| 2.4.2 蛋白浓度的测定(BCA法) | 第34页 |
| 2.4.3 蛋白的SDS-PAGE电泳及Western Blot分析 | 第34-35页 |
| 2.4.4 免疫沉淀 | 第35-36页 |
| 2.5 细胞相关实验及方法 | 第36-39页 |
| 2.5.1 细胞培养及传代 | 第36页 |
| 2.5.2 细胞瞬时转染 | 第36-37页 |
| 2.5.3 慢病毒转染 | 第37页 |
| 2.5.4 细胞荧光素酶活性检测 | 第37-39页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第39-54页 |
| 3.1 实验结果 | 第39-51页 |
| 3.1.1 人肝癌样品中JMJD2A的表达广泛下降 | 第39-40页 |
| 3.1.2 人肝癌样品中JMJD2A的mRNA水平广泛下调 | 第40-41页 |
| 3.1.3 JMJD2A在人肝癌细胞系中的表达 | 第41-42页 |
| 3.1.4 肝癌细胞中JMJD2A不能与p53协同转录激活p21 | 第42-43页 |
| 3.1.5 瞬时过表达JMJD2A可以使p27蛋白表达增多 | 第43-44页 |
| 3.1.6 慢病毒RNAi质粒ShJMJD2A的构建以及稳定敲低细胞株的建立 | 第44-46页 |
| 3.1.7 HepG2中JMJD2A稳定沉默可以使CyclinB1蛋白表达增多同时使p27蛋白表达减少 | 第46-47页 |
| 3.1.8 JMJD2A可以与β-catenin结合并与之有协同转录的能力 | 第47-49页 |
| 3.1.9 JMJD2A促进CAR的转录活性 | 第49-50页 |
| 3.1.10 稳定敲低GCN5可以减少JMJD2A的表达 | 第50-51页 |
| 3.2 分析与讨论 | 第51-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
