| ACKNOWLEDGEMENT | 第6-7页 |
| Abstract in English | 第7页 |
| Abstract in Chinese | 第8-14页 |
| CHAPTER 1 INTRODUCTION | 第14-31页 |
| 1.1 Overview of modern biotechnology | 第14-16页 |
| 1.1.1 Gene cloning | 第14-16页 |
| 1.2 Microbial enzymes | 第16-17页 |
| 1.3 β-1,3-glucan | 第17-18页 |
| 1.4 Negative effects of β-Glucans | 第18-19页 |
| 1.5 β-1,3-glucanases | 第19-20页 |
| 1.6 Structure and mechanism of action of β-1,3-glucanase | 第20-21页 |
| 1.7 Applications of β-1,3-glucanases | 第21-22页 |
| 1.8 Yeast β-1,3-glucan and β-1,3-glucanases | 第22-23页 |
| 1.9 Cloned β-1,3-glucanase genes | 第23-24页 |
| 1.10 pET Cloning system | 第24-27页 |
| 1.10.1 Plasmid pET22b(+) | 第26-27页 |
| 1.10.2 Advantages of using pET cloning system | 第27页 |
| 1.11 Cloning and expression of recombinant proteins in Escherichia coli | 第27-28页 |
| 1.12 Gel electrophoresis of DNA | 第28-30页 |
| 1.13 Objective of the study | 第30-31页 |
| CHAPTER 2 MATERIALS AND METHODS | 第31-44页 |
| 2.1 Microorganism strains | 第31页 |
| 2.1.1 Bacterial strains | 第31页 |
| 2.1.2 Yeast strain | 第31页 |
| 2.2 Plasmids | 第31-32页 |
| 2.2.1 Vector pMD 18-T | 第31-32页 |
| 2.2.2 Plasmid pET22b(+) | 第32页 |
| 2.3 Media | 第32-34页 |
| 2.3.1 LUFia-Berntani broth | 第32页 |
| 2.3.2 Yeast Peptone Dextrose broth | 第32页 |
| 2.3.4 SOB broth medium | 第32-33页 |
| 2.3.5 SOC broth medium | 第33页 |
| 2.3.6 Terrific broth medium | 第33页 |
| 2.3.7 Solid medium | 第33-34页 |
| 2.4 Reagents and Solutions | 第34-36页 |
| 2.4.1 TAE(50X)buffer | 第34页 |
| 2.4.2 Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside(IPTG)solution | 第34页 |
| 2.4.3 Agarose gel | 第34页 |
| 2.4.4 Calcium chloride(0.1M)solution | 第34页 |
| 2.4.5 Calcium chlorde-Magnesium chlorde solution | 第34页 |
| 2.4.6 Polymerase chain Reaction solutions | 第34页 |
| 2.4.7 Phosphate buffer saline | 第34-35页 |
| 2.4.8 Saccharine solution | 第35页 |
| 2.4.9 Tris-Magnesium sulphate solution | 第35页 |
| 2.4.10 Ampicillin | 第35页 |
| 2.4.11 Enzymes and buffer solutions | 第35页 |
| 2.4.12 Sodium acetate buffer | 第35页 |
| 2.4.13 Laminarin Substrate solution | 第35-36页 |
| 2.4.14 Equipment | 第36页 |
| 2.5 Methods | 第36-44页 |
| 2.5.1 Microorganisms growth conditions and screening procedures | 第36页 |
| 2.5.2 Extraction of yeast genomic DNA | 第36页 |
| 2.5.3 Storage of microorganisms strains as glycerol stocks | 第36-37页 |
| 2.5.4 Designing of PCR primers | 第37页 |
| 2.5.6 Performed Polymerase Chain Reaction | 第37页 |
| 2.5.7 Agarose gel electrophoresis | 第37-38页 |
| 2.5.8 Construction of pMD18-T-GLU plasmid | 第38页 |
| 2.5.9 Construction of expression vector | 第38-40页 |
| 2.5.9.1 Insert Preparation | 第38页 |
| 2.5.9.2 Vector Preparation | 第38-39页 |
| 2.5.9.3 Ligation | 第39-40页 |
| 2.5.10 Making competent cells | 第40页 |
| 2.5.11 Transformation of constructed plasmid into competent E.coli cells | 第40-41页 |
| 2.5.12 Colony PCR screening of the positive recombinant | 第41页 |
| 2.5.13 Analysis of the positive recombinant colonies | 第41页 |
| 2.5.14 Expression of the β-1,3-glucanase gene | 第41-42页 |
| 2.5.15 Preparation for IPTG induction of protein pxpression | 第42页 |
| 2.5.16 Isolation of periplasmic and cytoplasmic protein fractions | 第42-43页 |
| 2.5.17 Enzyme assays | 第43-44页 |
| CHAPTER 3 RESULTS AND DISCUSSION | 第44-56页 |
| 3.1 Extraction of yeast genomic DNA | 第44页 |
| 3.2 PCR products | 第44-45页 |
| 3.3 Construction of plasmid pMD18-T-GLU | 第45-47页 |
| 3.4 Transformation of pET22b-GLU into JM109 | 第47-48页 |
| 3.5 Identification of positive colony E.coli JM109 transformants | 第48页 |
| 3.6 Constructed plasmid pET22b-GLU | 第48-49页 |
| 3.7 Transformation of recombinant plasmid pET22b-GLU into E.coli strain BL21(DE3) | 第49-50页 |
| 3.8 Identification of the positive colony transformants of E.coli BL21(DE3) | 第50-51页 |
| 3.9 Verification of the recombinant plasmid pET22b-GLU in E.coli strain BL21(DE3) | 第51-53页 |
| 3.10 Nucleotide sequence analysis | 第53-56页 |
| CHAPTER 4 CONCLUSION AND RECOMMENDATION | 第56-57页 |
| 4.1 Conclusion | 第56页 |
| 4.2 Recommendation | 第56-57页 |
| REFERENCES | 第57-61页 |
