| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 前言 | 第11-26页 |
| 1 天青蛋白的研究背景 | 第11-14页 |
| 1.1 天青蛋白概述 | 第11-12页 |
| 1.2 天青蛋白的抗肿瘤作用 | 第12-14页 |
| 2 细胞凋亡与肿瘤 | 第14-19页 |
| 2.1 细胞凋亡概述 | 第14-16页 |
| 2.1.1 细胞凋亡的形态学特征 | 第15页 |
| 2.1.2 细胞凋亡的生化特征 | 第15-16页 |
| 2.2 细胞凋亡的分子机制 | 第16-17页 |
| 2.2.1 细胞凋亡的信号传导 | 第16页 |
| 2.2.2 细胞凋亡的酶学机制 | 第16页 |
| 2.2.3 p53与细胞凋亡 | 第16-17页 |
| 2.3 细胞凋亡与肿瘤 | 第17-18页 |
| 2.4 细胞凋亡与肿瘤治疗 | 第18-19页 |
| 3 细菌Ⅰ型和Ⅱ型分泌机制 | 第19-22页 |
| 3.1 细菌Ⅰ型分泌机制 | 第19-20页 |
| 3.2 细菌Ⅱ型分泌机制 | 第20-21页 |
| 3.3 Ⅰ与Ⅱ型分泌系统的应用 | 第21-22页 |
| 4 Red/ET同源重组 | 第22-25页 |
| 4.1 Red/ET同源重组的原理 | 第23-24页 |
| 4.2 Red/ET同源重组的优点及应用 | 第24-25页 |
| 5 立题依据和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-42页 |
| 1 实验材料 | 第26-32页 |
| 1.1 菌株、质粒和细胞 | 第26-27页 |
| 1.2 培养基和抗生素 | 第27-28页 |
| 1.2.1 细菌用培养基和抗生素 | 第27页 |
| 1.2.2 细胞用培养基和抗生素 | 第27-28页 |
| 1.3 试剂和引物 | 第28-31页 |
| 1.3.1 工具酶及抗体 | 第28页 |
| 1.3.2 DNA沉淀用试剂 | 第28页 |
| 1.3.3 试剂盒 | 第28页 |
| 1.3.4 琼脂糖凝胶电泳试剂 | 第28页 |
| 1.3.5 大肠杆菌感受态制备和转化试剂 | 第28页 |
| 1.3.6 蛋白质电泳试剂 | 第28-29页 |
| 1.3.7 Western Blot所需溶液 | 第29页 |
| 1.3.8 胶酶解用试剂 | 第29-30页 |
| 1.3.9 蛋白纯化用溶液 | 第30页 |
| 1.3.10 Bradford工作液的配制 | 第30页 |
| 1.3.11 引物 | 第30-31页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第31-32页 |
| 2 实验方法 | 第32-42页 |
| 2.1 假单胞菌(Pseudomonas putida)KT2440总DNA的提取 | 第32页 |
| 2.2 PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.3 GB2005感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.4 质粒pGB-Ptet CFT073 hlyABD提取以及酶切后线性片段的回收 | 第33-34页 |
| 2.5 大肠杆菌Ⅰ型分泌表达质粒pGB-Ptet PP azurin-hlyABD的构建 | 第34-35页 |
| 2.6 大肠杆菌Ⅱ型分泌表达质粒pGB-Ptet PP pel-azurin的构建 | 第35页 |
| 2.7 重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3) | 第35页 |
| 2.8 菌体的培养及诱导 | 第35页 |
| 2.9 细胞培养液上清中的可溶性蛋白的沉淀 | 第35-36页 |
| 2.10 重组菌株中天青蛋白的SDS-PAGE检测 | 第36页 |
| 2.11 免疫印迹杂交鉴定(Western Blot) | 第36-37页 |
| 2.12 天青蛋白的质谱鉴定 | 第37-39页 |
| 2.13 天青蛋白的纯化 | 第39页 |
| 2.14 Bradford法测定天青蛋白含量 | 第39-40页 |
| 2.15 细胞培养、增殖与传代 | 第40-41页 |
| 2.16 天青蛋白对肿瘤细胞的生长抑制作用 | 第41页 |
| 2.17 DNA电泳检测细胞凋亡 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-56页 |
| 1 大肠杆菌Ⅰ型分泌表达质粒pGB-Ptet PP azurin-hlyABD的构建 | 第42-45页 |
| 2 大肠杆菌Ⅱ型分泌表达质粒pGB-Ptet PP pel-azurin的构建 | 第45-47页 |
| 3 重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3) | 第47-49页 |
| 4 重组菌株的诱导表达和SDS-PAGE检测 | 第49页 |
| 5 Western Blot分析 | 第49-50页 |
| 6 质谱鉴定 | 第50-51页 |
| 7 天青蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| 8 天青蛋白的抗肿瘤作用 | 第52-54页 |
| 9 DNA电泳检测细胞凋亡 | 第54-56页 |
| 讨论 | 第56-61页 |
| 1 大肠杆菌Ⅰ型分泌表达载体pGB-Ptet PP azurin-hlyABD的构建 | 第56-58页 |
| 2 大肠杆菌Ⅱ型分泌表达质粒pGB-Ptet PP pel-azurin的构建 | 第58-59页 |
| 3 天青蛋白的抗肿瘤作用 | 第59页 |
| 4 Red/ET同源重组技术在构建小分子融合蛋白载体中的应用 | 第59-61页 |
| 主要结论和今后的研究设想 | 第61-62页 |
| 1 本研究的主要结论 | 第61页 |
| 2 今后工作设想 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-75页 |
| 附录 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
