| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-18页 |
| 1.1 红麻概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 红麻起源 | 第12页 |
| 1.1.2 红麻的综合利用 | 第12-13页 |
| 1.2 cDNA文库概述 | 第13-15页 |
| 1.2.1 全长cDNA文库 | 第13-14页 |
| 1.2.2 全长cDNA文库的构建方法 | 第14页 |
| 1.2.3 cDNA文库的应用前景及技术的局限性 | 第14-15页 |
| 1.2.3.1 cDNA文库的应用 | 第14-15页 |
| 1.2.3.2 cDNA文库的局限性 | 第15页 |
| 1.3 EST概述 | 第15-17页 |
| 1.3.1 EST技术简介 | 第15页 |
| 1.3.2 EST序列分析软件 | 第15-16页 |
| 1.3.3 EST技术应用 | 第16-17页 |
| 1.3.4 EST技术的局限性 | 第17页 |
| 1.4 课题学术及研究意义 | 第17页 |
| 1.5 创新之处 | 第17-18页 |
| 第二章 红麻叶片总RNA的提取 | 第18-27页 |
| 2.1 材料 | 第18页 |
| 2.2 主要仪器 | 第18页 |
| 2.3 试剂及用具器皿的处理 | 第18-19页 |
| 2.4 总RNA的提取 | 第19-21页 |
| 2.4.1 Trizol法参照杨成君方法并加以改良 | 第19页 |
| 2.4.2 蛋白酶K法参照武耀廷法并加以改良 | 第19-20页 |
| 2.4.3 SDS法参照杨成君法并加以改良 | 第20页 |
| 2.4.4 CTAB法参照胡根海法并加以改良 | 第20-21页 |
| 2.4.5 试剂盒法 | 第21页 |
| 2.5 琼脂糖凝胶电泳检测 | 第21页 |
| 2.6 紫外分光光度计检测 | 第21页 |
| 2.7 结果与讨论 | 第21-25页 |
| 2.7.1 结果 | 第21-23页 |
| 2.7.2 讨论 | 第23-25页 |
| 2.7.2.1 Trizol法 | 第23-24页 |
| 2.7.2.2 热硼酸法 | 第24页 |
| 2.7.2.3 SDS法 | 第24-25页 |
| 2.7.2.4 CTAB法 | 第25页 |
| 2.7.2.5 试剂盒法 | 第25页 |
| 2.8 本章小结 | 第25-27页 |
| 第三章 红麻叶片全长cDNA文库的构建 | 第27-38页 |
| 3.1 实验材料与菌株 | 第27页 |
| 3.2 主要仪器和试剂 | 第27页 |
| 3.2.1 主要仪器 | 第27页 |
| 3.2.2 实验主要试剂 | 第27页 |
| 3.3 实验方法 | 第27-28页 |
| 3.4 实验步骤 | 第28-32页 |
| 3.4.1 高质量红麻叶片总RNA的提取 | 第28页 |
| 3.4.2 红麻叶片cDNA第一链的合成 | 第28-29页 |
| 3.4.3 红麻叶片cDNA第二链的合成 | 第29-30页 |
| 3.4.4 双链cDNA的纯化 | 第30页 |
| 3.4.4.1 方案1：蛋白酶K消化 | 第30页 |
| 3.4.4.2 方案2：使用PCR产物纯化试剂盒 | 第30页 |
| 3.4.5 cDNA片段的分级分离 | 第30页 |
| 3.4.5.1 方案1：使用CHROMA SPIN-400柱进行分级分离 | 第30页 |
| 3.4.5.2 方案2：使用回收试剂盒进行分级分离 | 第30页 |
| 3.4.6 载体连接与转化 | 第30-31页 |
| 3.4.6.1 载体连接 | 第30页 |
| 3.4.6.2 转化 | 第30-31页 |
| 3.4.7 初始文库滴度测定与文库扩增及保存 | 第31页 |
| 3.4.8 菌液PCR | 第31-32页 |
| 3.5 结果分析 | 第32-35页 |
| 3.5.1 红麻叶片总RNA提取结果 | 第32页 |
| 3.5.2 红麻叶片cDNA第一链的合成结果 | 第32-33页 |
| 3.5.3 红麻叶片cDNA第二链的合成结果 | 第33页 |
| 3.5.4 双链cDNA纯化结果 | 第33-34页 |
| 3.5.5 红麻cDNA片段分级分离结果 | 第34页 |
| 3.5.6 cDNA文库质量检测结果 | 第34-35页 |
| 3.5.6.1 文库滴度测定结果 | 第34-35页 |
| 3.5.6.2 菌液PCR结果 | 第35页 |
| 3.6 讨论 | 第35-36页 |
| 3.6.1 总RNA的提取 | 第35-36页 |
| 3.6.2 双链cDNA的合成 | 第36页 |
| 3.6.3 双链cDNA的纯化与分级分离 | 第36页 |
| 3.6.4 双链cDNA的连接与转化 | 第36页 |
| 3.7 本章小结 | 第36-38页 |
| 第四章 EST测序及分析 | 第38-47页 |
| 4.1 实验材料与仪器 | 第38页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第38页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第38页 |
| 4.2 实验方法 | 第38页 |
| 4.2.1 单克隆的获得 | 第38页 |
| 4.2.2 测序 | 第38页 |
| 4.2.3 生物信息学分析 | 第38页 |
| 4.3 结果与分析 | 第38-45页 |
| 4.3.1 红麻叶片EST序列基本特征分析 | 第39-40页 |
| 4.3.2 同源序列比较与功能注释分析 | 第40-42页 |
| 4.3.3 红麻叶片EST同源序列物种来源 | 第42-43页 |
| 4.3.4 红麻叶片EST序列的基因GO分类结果 | 第43-45页 |
| 4.4 讨论 | 第45页 |
| 4.4.1 单克隆的获得 | 第45页 |
| 4.4.2 文库序列特征分析 | 第45页 |
| 4.4.3 unigene的同源序列比对及功能分析 | 第45页 |
| 4.4.4 红麻叶片EST序列的基因GO分类 | 第45页 |
| 4.5 本章小结 | 第45-47页 |
| 第五章 结论与展望 | 第47-48页 |
| 5.1 结论 | 第47页 |
| 5.2 展望 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 附录1 | 第55-56页 |
| 附录2 | 第56-58页 |
| 附录3 | 第58-59页 |
| 附录4 | 第59-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
