农杆菌介导的大麦转基因体系的优化与β-葡聚糖酶基因过表达的研究
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 大麦β-葡聚糖的提取及功能研究进展 | 第12-20页 |
| 1.1 β-葡聚糖的结构和种类 | 第12-13页 |
| 1.2 大麦籽粒中β-葡聚糖的含量及其影响因素 | 第13页 |
| 1.3 大麦β-葡聚糖的提取和纯化 | 第13-16页 |
| 1.3.1 乙醇和酶法提取大麦 | 第14页 |
| 1.3.2 异丙醇-硫酸铵法纯化大麦β-葡聚糖 | 第14-15页 |
| 1.3.3 酶和乙醇法提取纯化青稞β-葡聚糖 | 第15-16页 |
| 1.4 大麦β-葡聚糖的功能 | 第16-20页 |
| 1.4.1 啤酒和麦芽制造 | 第16-17页 |
| 1.4.2 动物饲料 | 第17页 |
| 1.4.3 医药 | 第17-20页 |
| 1.5 展望 | 第20页 |
| 2 研究内容及意义 | 第20-24页 |
| 2.1 大麦转基因的现状 | 第20-22页 |
| 2.2 β-葡聚糖酶基因的研究进展 | 第22-23页 |
| 2.3 研究目的 | 第23-24页 |
| 第二章 农杆菌介导的大麦转基因体系的优化 | 第24-44页 |
| 1 大麦未成熟胚的遗传转化 | 第24-35页 |
| 1.1 材料与方法 | 第24-27页 |
| 1.1.1 材料 | 第24页 |
| 1.1.2 试剂和主要仪器 | 第24页 |
| 1.1.3 AGL1标准接种物的制备 | 第24-25页 |
| 1.1.4 大麦未成熟种子的收集与灭菌 | 第25-26页 |
| 1.1.5 未成熟胚的分离与胚轴的去除 | 第26页 |
| 1.1.6 农杆菌接种和共培养 | 第26页 |
| 1.1.7 未成熟胚的清洗与抗性愈伤的筛选 | 第26页 |
| 1.1.8 抗性愈伤的分化与再生 | 第26-27页 |
| 1.1.9 试管苗培养 | 第27页 |
| 1.1.10 转基因苗的移栽 | 第27页 |
| 1.2 结果与分析 | 第27-35页 |
| 1.2.1 载体构建 | 第27-28页 |
| 1.2.2 未成熟胚的获取 | 第28-29页 |
| 1.2.3 农杆菌的侵染及共培养 | 第29-31页 |
| 1.2.4 愈伤的分化与植株的再生 | 第31-34页 |
| 1.2.5 再生幼苗根系的诱导与移栽 | 第34-35页 |
| 2 大麦成熟胚的遗传转化 | 第35-41页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第35-39页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 2.1.2 Bcl2基因的Entry载体构建 | 第36-38页 |
| 2.1.3 表达载体的构建 | 第38页 |
| 2.1.4 成熟胚的获取及愈伤的诱导 | 第38页 |
| 2.1.5 胚性愈伤的诱导及农杆菌侵染 | 第38页 |
| 2.1.6 抗性愈伤的筛选 | 第38页 |
| 2.1.7 愈伤的分化与植株的再生 | 第38-39页 |
| 2.1.8 试管苗的培养及移栽 | 第39页 |
| 2.1.9 转基因植株的PCR验证 | 第39页 |
| 2.2 结果与分析 | 第39-41页 |
| 2.2.1 成熟胚的愈伤诱导 | 第39页 |
| 2.2.2 农杆菌的侵染 | 第39-41页 |
| 2.2.3 愈伤的筛选及植株再生 | 第41页 |
| 3 总结 | 第41-44页 |
| 第三章 在大麦中过表达β-葡聚糖酶基因 | 第44-58页 |
| 1 材料与方法 | 第44-51页 |
| 1.1 材料 | 第44页 |
| 1.2 试剂和主要仪器 | 第44页 |
| 1.3 植物中核酸的提取 | 第44-45页 |
| 1.3.1 植物中DNA提取 | 第44-45页 |
| 1.3.2 植物总RNA的提取 | 第45页 |
| 1.4 Southern Blotting | 第45-47页 |
| 1.4.1 模板DNA的酶切与电泳 | 第45-46页 |
| 1.4.2 转膜 | 第46页 |
| 1.4.3 固定 | 第46页 |
| 1.4.4 杂交 | 第46页 |
| 1.4.5 检测前的洗膜 | 第46-47页 |
| 1.4.6 检测 | 第47页 |
| 1.5 RT-PCR | 第47-48页 |
| 1.5.1 逆转录 | 第47-48页 |
| 1.5.2 半定量PCR及其引物 | 第48页 |
| 1.6 大麦籽粒及麦芽中β-葡聚糖含量的测定 | 第48-49页 |
| 1.7 大麦麦芽β-glucanase酶活的测定 | 第49-50页 |
| 1.8 淀粉含量的测定 | 第50-51页 |
| 2 实验结果与分析 | 第51-55页 |
| 2.1 β-葡聚糖酶过表达株系的分子鉴定 | 第51页 |
| 2.2 大麦麦芽中β-葡聚糖酶的活性 | 第51-52页 |
| 2.3 大麦籽粒及麦芽中β-葡聚糖含量 | 第52-54页 |
| 2.4 大麦籽粒千粒重及淀粉的含量 | 第54-55页 |
| 3 讨论与展望 | 第55-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-66页 |
| 附录 | 第66-69页 |
