| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 PEAR 技术制备硫代和 2’-氟修饰的寡核苷酸 | 第11-42页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 寡核苷酸药物研究的复兴 | 第11-13页 |
| 1.2 寡核苷酸药物存在的问题以及解决方法 | 第13-15页 |
| 1.3 反义寡核苷酸制备技术存在的问题 | 第15-16页 |
| 1.4 寡核苷酸扩增技术研究进展 | 第16-18页 |
| 1.5 PEAR 技术的原理 | 第18-20页 |
| 2 研究的内容和意义 | 第20页 |
| 3 材料和方法 | 第20-25页 |
| 3.1 材料 | 第20-22页 |
| 3.2 实验方法 | 第22-25页 |
| 3.2.1 PEAR 反应以及 PEAR 产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第22-23页 |
| 3.2.2 PEAR 产物的克隆及测序 | 第23-24页 |
| 3.2.3 PEAR 反应产物的质谱分析 | 第24-25页 |
| 4 结果分析 | 第25-41页 |
| 4.1 PEAR 扩增修饰的寡核苷酸 | 第25-29页 |
| 4.1.1 Phusion 高保真 DNA 聚合酶和 PspGI 浓度的优化 | 第25页 |
| 4.1.2 PEAR 扩增硫代磷酸修饰的寡核苷酸 | 第25-27页 |
| 4.1.3 PEAR 扩增 2’-氟修饰的寡核苷酸 | 第27-29页 |
| 4.2 修饰的 PEAR 产物的酶切 | 第29-32页 |
| 4.2.1 硫代修饰的 PEAR 产物的酶切 | 第29-31页 |
| 4.2.2 2’-氟修饰的 PEAR 产物的酶切 | 第31-32页 |
| 4.3 PEAR 产物的克隆和测序 | 第32-33页 |
| 4.4 PEAR 产物的质谱分析 | 第33-41页 |
| 4.4.1 dATPαS 修饰的 PEAR 产物的质谱检测 | 第33-35页 |
| 4.4.2 dATPαS 和 dGTPαS 双修饰的 PEAR 产物的质谱检测 | 第35-39页 |
| 4.4.3 2’-Fl-dATP 修饰的 PEAR 产物的质谱检测 | 第39-41页 |
| 5 讨论 | 第41-42页 |
| 第二章 PEAR 大量制备靶向 miR-30a 的寡核苷酸及其促凋亡活性的初步研究 | 第42-59页 |
| 1 前言 | 第42-47页 |
| 1.1 miRNA 的产生以及其功能研究 | 第42-44页 |
| 1.1.1 miRNA 的产生 | 第42页 |
| 1.1.2 miRNA 的功能 | 第42-43页 |
| 1.1.3 miRNA 功能研究：人工合成 miRNA 及其反义核酸 | 第43-44页 |
| 1.2 miRNA 与癌症 | 第44-47页 |
| 1.2.1 miRNA 与癌症的关系 | 第44-46页 |
| 1.2.2 p53 与癌症 | 第46-47页 |
| 2 研究的内容及意义 | 第47页 |
| 3 材料和方法 | 第47-51页 |
| 3.1 材料 | 第47-48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-51页 |
| 3.2.1 人类胃癌细胞的培养 | 第48-49页 |
| 3.2.2 脂质体转染 | 第49-50页 |
| 3.2.3 Hoechst 33342 和碘化丙啶(PI)双染检测细胞凋亡 | 第50页 |
| 3.2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第50-51页 |
| 4 结果分析 | 第51-57页 |
| 4.1 反义寡核苷酸的浓度和处理时间的优化 | 第51-53页 |
| 4.2 Hoechst 33342 和 PI 双染检测细胞凋亡 | 第53-54页 |
| 4.3 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第54-57页 |
| 5 讨论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 个人简历 | 第66页 |
| 发表的学术论文 | 第66-67页 |
