| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第10-20页 |
| 1.1 EV71的结构特征 | 第11-12页 |
| 1.2 EV71的复制和生活史 | 第12页 |
| 1.3 流行病学 | 第12-13页 |
| 1.4 病理机制 | 第13-14页 |
| 1.5 EV71感染的临床特征 | 第14-15页 |
| 1.6 EV71感染和免疫反应 | 第15-16页 |
| 1.7 EV71感染动物模型 | 第16-18页 |
| 1.8 拯救病毒构建技术 | 第18-19页 |
| 1.9 本次研究思路 | 第19-20页 |
| 2 材料和方法 | 第20-59页 |
| 2.1 材料 | 第20-25页 |
| 2.1.1 工程菌 | 第20页 |
| 2.1.2 病毒 | 第20页 |
| 2.1.3 哺乳动物细胞系 | 第20页 |
| 2.1.4 质粒 | 第20页 |
| 2.1.5 引物 | 第20-21页 |
| 2.1.6 PCR聚合酶、酶切和连接工具酶以及其它相关试剂 | 第21页 |
| 2.1.7 分子量标准 | 第21-22页 |
| 2.1.8 抗体 | 第22-23页 |
| 2.1.9 转染试剂 | 第23页 |
| 2.1.10 试剂盒 | 第23页 |
| 2.1.11 其他主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.12 主要耗材 | 第24页 |
| 2.1.13 主要设备仪器 | 第24-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-59页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第25页 |
| 2.2.2 病毒的培养、滴定、浓缩 | 第25-26页 |
| 2.2.3 EV71感染性克隆的构建 | 第26-36页 |
| 2.2.4 绿色荧光蛋白重组病毒的构建 | 第36-46页 |
| 2.2.5 绿色荧光蛋白重组病毒的传代与鉴定 | 第46-50页 |
| 2.2.6 绿色荧光重组EV71(EGFP-EV71)病毒感染恒河猴婴猴的实验 | 第50-56页 |
| 2.2.7 分离外周血树突状细胞,以EGFP-EV71感染树突状细胞 | 第56-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-86页 |
| 3.1 构建感染性克隆 | 第59-67页 |
| 3.1.1 EV71全长cDNA感染性克隆质粒的构建 | 第59-61页 |
| 3.1.2 全长cDNA的序列测序和分析 | 第61-62页 |
| 3.1.3 重组质粒的纯化 | 第62-63页 |
| 3.1.4 线性化重组质粒pSP64 Poly(A)-EV71(1-7409) | 第63页 |
| 3.1.5 体外转录 | 第63-64页 |
| 3.1.6 EV71基因组体外转录本转染Vero细胞并获得拯救病毒 | 第64页 |
| 3.1.7 拯救病毒特征 | 第64-67页 |
| 3.2 绿色荧光蛋白重组病毒的构建 | 第67-72页 |
| 3.2.1 绿色荧光蛋白重组病毒基因组重组质粒的构建 | 第67-69页 |
| 3.2.2 获得绿色荧光蛋白重组病毒(EGFP-EV71) | 第69-70页 |
| 3.2.3 绿色荧光蛋白重组病毒(EGFP-EV71)生长曲线、中和实验、噬斑形态、SDS-PAGE电泳 | 第70-72页 |
| 3.3 绿色荧光重组EV71病毒(EGFP-EV71)感染恒河猴婴猴 | 第72-84页 |
| 3.3.1 EGFP-EV71感染恒河猴婴猴的临床特征观察 | 第72-73页 |
| 3.3.2 EGFP-EV71感染恒河猴婴猴,呼吸道感染比肠道感染所引起病理特征明显 | 第73-75页 |
| 3.3.3 EGFP-EV71感染恒河猴婴猴后在呼吸道及其上皮细胞增殖 | 第75-77页 |
| 3.3.4 EGFP-EV71呼吸道感染恒河猴婴猴初期病毒载量主要分布情况 | 第77页 |
| 3.3.5 EGFP-EV71感染恒河猴婴猴后在淋巴结中增殖 | 第77-78页 |
| 3.3.6 EGFP-EV71感染恒河猴婴猴并在中枢神经系统中增殖 | 第78-79页 |
| 3.3.7 EGFP-EV71感染恒河猴婴猴后出现病毒血症 | 第79-80页 |
| 3.3.8 流式细胞术分析EGFP-EV71感染恒河猴婴猴树突状细胞 | 第80-81页 |
| 3.3.9 流式细胞术分析EGFP-EV71偏好感染恒河猴婴猴CD141~+DCs | 第81-82页 |
| 3.3.10 免疫荧光共定位分析EGFP-EV71感染恒河猴婴猴树突状细胞 | 第82-84页 |
| 3.4 EGFP-EV71感染恒河猴婴猴外周血树突状细胞体外实验 | 第84-86页 |
| 3.4.1 在体外EGFP-EV71感染DC | 第84-85页 |
| 3.4.2 体外EGFP-EV71感染CD141~+DC细胞并刺激DC成熟 | 第85页 |
| 3.4.3 体外EGFP-EV71感染DC并分泌细胞因子 | 第85-86页 |
| 4 讨论 | 第86-92页 |
| 小结 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-104页 |
| 论文综述 | 第104-125页 |
| 参考文献 | 第113-125页 |
| 附录1 EV71全长cDNA测序后与FY-23株比对结果(黑色为完全匹配) | 第125-138页 |
| 附录2 英文缩略语表 | 第138-139页 |
| 附录3 主要工程菌培养液的配制 | 第139-140页 |
| 附录4 主要细胞培养溶液配制 | 第140-141页 |
| 附录5 其他主要试剂的配置 | 第141-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
| 研究生简历 | 第145-146页 |
