| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩写一览表 | 第15-17页 |
| 1. 引言 | 第17-25页 |
| 1.1. 研究背景 | 第17-22页 |
| 1.1.1. 肝癌及其治疗现状 | 第17-18页 |
| 1.1.2. SIRT1及其抑制剂的研究进展 | 第18-20页 |
| 1.1.3. SIRT1与肝癌 | 第20页 |
| 1.1.4. 计算机辅助药物设计 | 第20-21页 |
| 1.1.5. 虚拟筛选 | 第21-22页 |
| 1.1.6. 分子动力学 | 第22页 |
| 1.2. 研究目的及意义 | 第22页 |
| 1.3. 研究内容及拟解决的关键问题 | 第22-24页 |
| 1.3.1. 研究内容 | 第22-23页 |
| 1.3.2. 拟解决的关键问题 | 第23-24页 |
| 1.4. 主要技术路线 | 第24-25页 |
| 2. 基于SIRT1受体的小分子抑制剂的虚拟筛选 | 第25-31页 |
| 2.1. 小分子抑制剂的虚拟筛选 | 第25-26页 |
| 2.1.1. 实验数据来源 | 第25页 |
| 2.1.2. 实验软件 | 第25页 |
| 2.1.3. 实验流程及方法 | 第25-26页 |
| 2.2. 实验结果 | 第26-30页 |
| 2.2.1. SIRT1受体蛋白的选择及处理 | 第26页 |
| 2.2.2. 分子对接虚拟筛选结果 | 第26-28页 |
| 2.2.3. 实验结果分析 | 第28-30页 |
| 2.3. 实验结果分析 | 第30-31页 |
| 3. SIRT1小分子抑制剂T对细胞的增殖抑制效应 | 第31-41页 |
| 3.1. 实验材料 | 第31-33页 |
| 3.1.1. 主要实验材料 | 第31页 |
| 3.1.2. 主要试剂耗材 | 第31-32页 |
| 3.1.3. 主要仪器设备 | 第32页 |
| 3.1.4. 主要溶液配制 | 第32-33页 |
| 3.2. 实验方法 | 第33-35页 |
| 3.2.1. CCK-8 法检测HepG2、Huh-7、MB-MDA231、L02、Jurkat、K562、He La、KM3、A549、Caski细胞增殖试验 | 第33-35页 |
| 3.2.2. 统计学分析 | 第35页 |
| 3.3. 实验结果 | 第35-40页 |
| 3.3.1. 小分子抑制剂T对HepG2、MDA-231、KM3、K562、Caski、A549、Hela、Jurkat细胞的增殖抑制 | 第35-37页 |
| 3.3.2. Nicotinamide、EX-527、Sirtinol及小分子抑制剂T对HepG2细胞的增殖抑制 | 第37页 |
| 3.3.3. 小分子抑制剂T对HepG2、Huh-7 细胞的增殖抑制 | 第37-38页 |
| 3.3.4. 小分子抑制剂T对HepG2、L02细胞的增殖抑制 | 第38-39页 |
| 3.3.5. 小分子抑制剂T处理HepG2细胞 48h后细胞形态学观察 | 第39-40页 |
| 3.4. 实验结果分析 | 第40-41页 |
| 4. SIRT1小分子抑制剂T对肝癌细胞的凋亡诱导效应 | 第41-47页 |
| 4.1. 实验材料 | 第41页 |
| 4.1.1. 主要试剂耗材 | 第41页 |
| 4.1.2. 主要仪器设备 | 第41页 |
| 4.1.3. 溶液的配制 | 第41页 |
| 4.2. 实验方法 | 第41-43页 |
| 4.2.1. 小分子抑制剂T诱导HepG2肝癌细胞凋亡的流式细胞仪检测 | 第41-42页 |
| 4.2.2. 统计学分析 | 第42-43页 |
| 4.3. Annexin V/PI双染检测HepG2肝癌细胞凋亡的结果 | 第43-46页 |
| 4.4. 结果分析 | 第46-47页 |
| 5. SIRT1小分子抑制剂T在蛋白水平的验证 | 第47-55页 |
| 5.1. 实验材料 | 第47-48页 |
| 5.1.1. 主要试剂耗材 | 第47页 |
| 5.1.2. 主要抗体 | 第47-48页 |
| 5.1.3. 主要试剂配制 | 第48页 |
| 5.2. 实验方法 | 第48-52页 |
| 5.2.1. 蛋白样品的提取 | 第48-49页 |
| 5.2.2. BCA试剂盒测定蛋白浓度 | 第49-50页 |
| 5.2.3. 电泳上样的样品准备 | 第50页 |
| 5.2.4. SDS-PAGE凝胶配制 | 第50页 |
| 5.2.5. 上样与电泳 | 第50-51页 |
| 5.2.6. 转膜 | 第51页 |
| 5.2.7. 封闭 | 第51页 |
| 5.2.8. 一抗孵育 | 第51页 |
| 5.2.9. 二抗孵育 | 第51页 |
| 5.2.10. 化学发光 | 第51-52页 |
| 5.2.11. 统计学分析 | 第52页 |
| 5.3. 实验结果 | 第52-53页 |
| 5.4. 实验结果分析 | 第53-55页 |
| 5.4.1. 不同浓度药物处理HepG2细胞 48h后对SIRT1蛋白表达的影响 | 第53-54页 |
| 5.4.2. 不同浓度药物处理HepG2细胞 48h后对P53蛋白表达的影响 | 第54页 |
| 5.4.3. 不同浓度药物处理HepG2细胞 48h后对C-Jun蛋白表达的影响 | 第54页 |
| 5.4.4. 不同浓度药物处理HepG2细胞 48h后对CYP3A4蛋白表达的影响 | 第54-55页 |
| 6. SIRT1小分子抑制剂T在裸鼠模型的抗肝癌活性研究 | 第55-67页 |
| 6.1. 实验材料 | 第55-56页 |
| 6.1.1. 实验动物 | 第55页 |
| 6.1.2. 细胞株 | 第55页 |
| 6.1.3. 主要试剂 | 第55-56页 |
| 6.1.4. 实验器材 | 第56页 |
| 6.1.5. 主要试剂配制 | 第56页 |
| 6.2. 实验方法 | 第56-59页 |
| 6.2.1. 两种人肝癌细胞HepG2、Huh-7 的复苏、培养及传代 | 第56-57页 |
| 6.2.2. 台盼蓝染色计数活细胞 | 第57-58页 |
| 6.2.3. HepG2、Huh-7 人肝癌细胞荷瘤裸鼠模型的建立及分组 | 第58页 |
| 6.2.4. 每日测量并计算荷瘤裸鼠模型瘤体体积变化 | 第58页 |
| 6.2.5. HepG2、Huh-7 两种人肝癌细胞荷瘤裸鼠的瘤体病理切片与免疫组化分析. | 第58-59页 |
| 6.2.6. 统计学分析 | 第59页 |
| 6.3. 实验结果 | 第59-65页 |
| 6.3.1. HepG2与Huh-7 人肝癌细胞荷瘤裸鼠组组间的瘤体体积变化 | 第59-61页 |
| 6.3.2. HepG2人肝癌细胞荷瘤裸鼠组组间的瘤体体积变化 | 第61页 |
| 6.3.3. 计算抑瘤率 | 第61-62页 |
| 6.3.4. HepG2、Huh-7 两种人肝癌细胞荷瘤裸鼠组的瘤体病理切片与免疫组化分析 | 第62-63页 |
| 6.3.5. HepG2人肝癌细胞荷瘤裸鼠组的瘤体病理切片与免疫组化分析 | 第63-65页 |
| 6.4. 结果分析 | 第65-67页 |
| 7. 全文总结 | 第67-69页 |
| 7.1. 课题概述 | 第67-68页 |
| 7.2. 课题创新点 | 第68页 |
| 7.3. 课题存在的问题 | 第68页 |
| 7.4. 课题展望 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 附录 | 第75-78页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文及取得的研究成果 | 第78-79页 |
