| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第11-24页 |
| 1.1 植物抗病研究进展 | 第11-15页 |
| 1.1.1 植物免疫系统 | 第11-12页 |
| 1.1.2 激素信号路径在植物免疫中的作用 | 第12-15页 |
| 1.2 棉花及棉花抗黄萎病研究进展 | 第15-20页 |
| 1.2.1 棉花及棉花主要病害概述 | 第15-16页 |
| 1.2.2 黄萎病菌致病机制 | 第16-17页 |
| 1.2.3 棉花对病原菌的组织结构抗性 | 第17-18页 |
| 1.2.4 棉花对病原菌的理化抗性 | 第18页 |
| 1.2.5 棉花抗黄萎病信号反应 | 第18-20页 |
| 1.3 VIGS技术及其应用 | 第20-21页 |
| 1.3.1 VIGS技术原理 | 第20页 |
| 1.3.2 VIGS技术的应用 | 第20-21页 |
| 1.4 泛素/26S蛋白酶体途径及其在植物中的功能研究 | 第21-22页 |
| 1.5 本课题研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 2 材料方法 | 第24-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.1.2 主要菌株和载体 | 第24页 |
| 2.1.3 主要酶类和试剂 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 Gb PAF1的克隆及序列分析 | 第25页 |
| 2.2.2 Gb PAF1表达模式分析 | 第25-26页 |
| 2.2.3 棉花根系RNA的提取及浓度测定 | 第26页 |
| 2.2.4 反转录总RNA合成c DNA | 第26页 |
| 2.2.5 RT-PCR和qRT-PCR分析 | 第26-27页 |
| 2.2.6 VIGS载体构建 | 第27-28页 |
| 2.2.7 棉花幼苗培育 | 第28页 |
| 2.2.8 棉花幼苗的VIGS处理 | 第28-29页 |
| 2.2.9 激素含量测定 | 第29-30页 |
| 2.2.10 棉花黄萎病病原菌的活化及培养 | 第30页 |
| 2.2.11 棉花黄萎病菌的接种 | 第30-31页 |
| 2.2.12 棉花幼苗接菌后发病率及病指统计 | 第31页 |
| 2.2.13 接菌后对棉株剖秆观察及茎段恢复培养 | 第31页 |
| 2.2.14 烟草中Gb PAF1的亚细胞定位 | 第31-32页 |
| 2.2.15 转基因表达载体构建和棉花遗传转化 | 第32-33页 |
| 2.2.16 转基因植株阳性鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.17 转基因植株表达量鉴定 | 第34页 |
| 2.2.18 转基因植株拷贝数鉴定 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-51页 |
| 3.1 泛素化相关基因Gb PAF1在棉花中的序列分析 | 第35-36页 |
| 3.2 Gb PAF1在不同物种中的进化分析 | 第36-37页 |
| 3.3 Gb PAF1表达模式分析 | 第37-39页 |
| 3.3.1 GbPAF1在陆地棉不同组织中的表达分析 | 第37页 |
| 3.3.2 GbPAF1在海岛棉受黄萎病诱导后的表达模式分析 | 第37-38页 |
| 3.3.3 相关激素诱导后Gb PAF1的表达模式分析 | 第38-39页 |
| 3.4 GbPAF1蛋白在烟草中的亚细胞定位 | 第39-40页 |
| 3.5 VIGS沉默目标基因后海岛棉棉株表型 | 第40-43页 |
| 3.6 Gb PAF1抑制表达后降低棉株对黄萎病菌的抵御能力 | 第43-44页 |
| 3.7 Gb PAF1抑制表达接种后激素信号路径检测 | 第44-46页 |
| 3.8 Gb PAF1抑制表达后棉花对灰霉的抗性鉴定 | 第46-47页 |
| 3.9 Gb PAF1转基因后代鉴定 | 第47-51页 |
| 3.9.1 GbPAF1转基因后代鉴定 | 第47页 |
| 3.9.2 转基因T0代拷贝数鉴定 | 第47-49页 |
| 3.9.3 转基因植株抗病信号路径检测 | 第49-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| 4.1 Gb PAF1在植物生长发育中具有重要作用 | 第51-52页 |
| 4.2 Gb PAF1参与棉花对黄萎病菌的抗性 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-64页 |
| 附录 | 第64-73页 |
| 附录 1．主要缓冲液的配制 | 第64-65页 |
| 附录 2．培养基配方 | 第65-66页 |
| 附录 3．棉花基因组DNA抽提方法 | 第66-67页 |
| 附录 4．棉花基因组RNA抽提方法(异硫氰酸胍法) | 第67-68页 |
| 附录 5．Southern杂交步骤 | 第68-72页 |
| 附录 6．实验中用到的引物序列 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
