| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 综述 | 第11-20页 |
| 1.1 纤维素酶的研究进展 | 第11-15页 |
| 1.1.1 纤维素酶的应用 | 第11-12页 |
| 1.1.2 纤维素酶的组成与特征 | 第12-14页 |
| 1.1.3 纤维素酶的分子结构与功能 | 第14-15页 |
| 1.2 纤维素酶相关功能基因研究 | 第15-16页 |
| 1.3 纤维素酶中功能基因异源表达的研究 | 第16-19页 |
| 1.3.1 纤维素酶中相关基因在毕赤酵母中表达的研究 | 第16-17页 |
| 1.3.2 纤维素酶中相关基因在酿酒酵母中表达的研究 | 第17-18页 |
| 1.3.3 纤维素酶中相关基因在E. coli中表达的研究 | 第18-19页 |
| 1.4 研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 绿木霉T. virens ZY-01 中内切葡聚糖酶EG Ⅳ基因的克隆 | 第20-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第20页 |
| 2.1.2 酶与试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 培养基 | 第21页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第21-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-26页 |
| 2.2.1 绿木霉T. virens ZY-01 孢子收集 | 第22页 |
| 2.2.2 绿木霉T. virens ZY-01 RNA的提取 | 第22页 |
| 2.2.3 cDNA的合成 | 第22-23页 |
| 2.2.4 引物的设计 | 第23页 |
| 2.2.5 PCR扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.6 目的基因的回收 | 第24页 |
| 2.2.7 载体pET-32a的提取 | 第24页 |
| 2.2.8 载体的双酶切及连接 | 第24-25页 |
| 2.2.9 感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.2.10 转化 | 第25页 |
| 2.2.11 重组鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.12 测序 | 第26页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第26-32页 |
| 2.3.1 活化绿木霉T. virens ZY-01 | 第26-27页 |
| 2.3.2 绿木霉T. virens ZY-01 总RNA的提取 | 第27页 |
| 2.3.3 PCR克隆结果 | 第27-29页 |
| 2.3.4 载体酶切回收结果 | 第29页 |
| 2.3.5 菌落PCR检测结果 | 第29-30页 |
| 2.3.6 重组质粒双酶切验证结果 | 第30-31页 |
| 2.3.7 测序结果 | 第31-32页 |
| 2.4 小结 | 第32-34页 |
| 第三章 内切葡聚糖酶在E. coli中的表达及纯化 | 第34-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第34-36页 |
| 3.1.1 宿主菌 | 第34页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第34页 |
| 3.1.3 主要溶液配制 | 第34-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-41页 |
| 3.2.1 重组质粒转化至E. coli BL21(DE3)感受态细胞 | 第36页 |
| 3.2.2 重组蛋白的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第36-37页 |
| 3.2.3 目的蛋白的初步纯化 | 第37页 |
| 3.2.4 镍柱的重生 | 第37-38页 |
| 3.2.5 蛋白的浓度测量 | 第38-39页 |
| 3.2.6 粗酶液的提取 | 第39页 |
| 3.2.7 粗酶液酶活的测定 | 第39-41页 |
| 3.2.8 重组酶比酶活的测定 | 第41页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第41-45页 |
| 3.3.1 重组蛋白表达情况分析 | 第41-43页 |
| 3.3.2 重组蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| 3.3.3 纯化前后比酶活的测定 | 第44-45页 |
| 3.4 小结 | 第45-46页 |
| 第四章 重组内切葡聚糖酶酶学性质的研究 | 第46-55页 |
| 4.1 实验试剂 | 第46页 |
| 4.2 实验方法 | 第46-48页 |
| 4.2.1 粗酶液的制备 | 第46页 |
| 4.2.2 酶活测定方法 | 第46-47页 |
| 4.2.3 重组酶酶学性质的研究 | 第47-48页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第48-54页 |
| 4.3.1 酶催化反应动力学常数测定 | 第48-49页 |
| 4.3.2 重组酶的最适反应pH的测定 | 第49-50页 |
| 4.3.3 重组酶最适反应温度 | 第50-51页 |
| 4.3.4 重组酶热稳定性的测定 | 第51-52页 |
| 4.3.5 重组酶pH稳定性的测定 | 第52页 |
| 4.3.6 不同离子对重组酶酶活的影响 | 第52-53页 |
| 4.3.7 最适Mn~(2+)浓度对重组酶的影响 | 第53-54页 |
| 4.4 小结 | 第54-55页 |
| 第五章 总结及展望 | 第55-57页 |
| 5.1 结论 | 第55页 |
| 5.2 展望 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 附录1 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第66-67页 |
| 附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目 | 第67页 |
