| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1 研究背景 | 第12页 |
| 2 文献综述 | 第12-22页 |
| 2.1 迟钝爱德华菌一般生物学特征 | 第12-13页 |
| 2.2 流行病学研究 | 第13-14页 |
| 2.3 致病症状及病理变化 | 第14页 |
| 2.4 迟钝爱德华菌病检测及防治 | 第14-15页 |
| 2.5 迟钝爱德华菌侵染机制研究 | 第15-19页 |
| 2.5.1 细菌的黏附和侵入 | 第15-16页 |
| 2.5.2 逃避和抵抗宿主的免疫机制 | 第16-17页 |
| 2.5.3 与宿主争夺营养物质并产生毒素 | 第17-18页 |
| 2.5.4 三型分泌系统和六型分泌系统的调节 | 第18-19页 |
| 2.6 蛋白质组学研究进展 | 第19-20页 |
| 2.7 本试验的研究意义 | 第20-22页 |
| 第二章 迟钝爱德华菌侵染对鳗鲡肝细胞蛋白表达的影响 | 第22-40页 |
| 第一节 细胞侵染模型的构建 | 第22-28页 |
| 1 材料 | 第22-23页 |
| 1.1 菌株和细胞 | 第22页 |
| 1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 1.3 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2 方法 | 第23页 |
| 2.1 侵染菌体EIB202的培养及处理 | 第23页 |
| 2.2 鳗鲡肝细胞(ELC)的传代 | 第23页 |
| 2.3 EIB202对ELC的侵染及观察 | 第23页 |
| 3 结果与分析 | 第23-26页 |
| 3.1 不同侵染时间点细胞病变 | 第23-26页 |
| 4 讨论 | 第26-28页 |
| 第二节 鳗鲡肝细胞蛋白的制备及差异分析 | 第28-40页 |
| 1 材料 | 第28页 |
| 1.1 菌株和细胞 | 第28页 |
| 1.2 主要试剂 | 第28页 |
| 1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 2 方法 | 第28-30页 |
| 2.1 不同侵染时期细胞的收集和蛋白的提取 | 第28-29页 |
| 2.2 细胞蛋白的浓度测定及SDS-PAGE分析 | 第29页 |
| 2.3 利用iTRAQ技术分析各侵染时期细胞蛋白 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-36页 |
| 3.1 鳗鲡肝细胞收集方法比较 | 第30页 |
| 3.2 鳗鲡肝细胞蛋白浓度的测定及SDS-PAGE分析 | 第30-31页 |
| 3.3 不同侵染时间点鳗鲡肝细胞差异蛋白的鉴定和筛选 | 第31-36页 |
| 4 讨论 | 第36-40页 |
| 第三章 迟钝爱德华菌EIB202侵染相关基因PuAH的功能研究 | 第40-66页 |
| 第一节 迟钝爱德华菌EIB202 PuAH基因的克隆及重组质粒的构建 | 第40-48页 |
| 1 材料 | 第40-41页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第40页 |
| 1.2 主要试剂 | 第40-41页 |
| 1.3 主要仪器 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-45页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第41页 |
| 2.2 基因组DNA模板的提取 | 第41页 |
| 2.3 PuAH基因的PCR扩增 | 第41-42页 |
| 2.4 PCR产物的回收 | 第42-43页 |
| 2.5 PuAH基因的克隆及鉴定 | 第43-44页 |
| 2.6 原核表达载体的构建及鉴定 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-47页 |
| 3.1 PuAH基因的PCR扩增结果 | 第45页 |
| 3.2 PuAH基因的克隆及鉴定 | 第45-46页 |
| 3.3 原核表达载体的构建及鉴定 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-48页 |
| 第二节 融合蛋白的诱导表达、条件优化及蛋白纯化 | 第48-56页 |
| 1 材料 | 第48页 |
| 1.1 菌株 | 第48页 |
| 1.2 主要试剂 | 第48页 |
| 1.3 主要仪器 | 第48页 |
| 2 方法 | 第48-50页 |
| 2.1 重组质粒pET32a-PuAH的诱导表达 | 第48-49页 |
| 2.2 融合蛋白表达条件的优化 | 第49页 |
| 2.3 融合蛋白的纯化及复性 | 第49-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-55页 |
| 3.1 融合蛋白的诱导表达 | 第50-52页 |
| 3.2 诱导条件的优化 | 第52-54页 |
| 3.3 融合蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-56页 |
| 第三节 融合蛋白兔抗血清的制备及该蛋白部分特性分析 | 第56-66页 |
| 1 材料 | 第56页 |
| 1.1 菌株和细胞 | 第56页 |
| 1.2 试验动物 | 第56页 |
| 1.3 主要试剂 | 第56页 |
| 1.4 主要仪器 | 第56页 |
| 2 方法 | 第56-60页 |
| 2.1 融合蛋白兔抗血清的制备 | 第56-57页 |
| 2.2 兔抗血清效价的测定 | 第57-58页 |
| 2.2.1 间接ELISA法测定血清抗体对融合蛋白的抗体效价 | 第57-58页 |
| 2.2.2 间接ELISA法测定血清抗体对EIB202外膜蛋白(OMP)的抗体效价 | 第58页 |
| 2.3 融合蛋白抗原性和免疫原性分析 | 第58-59页 |
| 2.3.1 融合蛋白免疫原性分析 | 第58-59页 |
| 2.3.2 融合蛋白抗原性分析 | 第59页 |
| 2.4 EIB202菌体凝集试验 | 第59页 |
| 2.5 融合蛋白的溶血性分析 | 第59页 |
| 2.6 融合蛋白的黏附性分析 | 第59-60页 |
| 3 结果与分析 | 第60-63页 |
| 3.1 兔抗血清效价测定 | 第60-61页 |
| 3.2 融合蛋白抗原性和免疫原性分析 | 第61-62页 |
| 3.3 菌体凝集试验结果 | 第62页 |
| 3.4 融合蛋白溶血性分析 | 第62-63页 |
| 3.5 融合蛋白的黏附功能分析结果 | 第63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| 总结 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 附录 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 攻读硕士学位期间的主要科研成果 | 第79页 |
