| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第12-26页 |
| 1.1 酶分子改造方法概述 | 第12-17页 |
| 1.1.1 点突变 | 第12-13页 |
| 1.1.1.1 随机点突变 | 第12页 |
| 1.1.1.2 定点突变 | 第12-13页 |
| 1.1.2 盒式突变 | 第13页 |
| 1.1.3 DNA改组 | 第13-16页 |
| 1.1.3.2 交错延伸法 | 第14-15页 |
| 1.1.3.3 DNA家族改组 | 第15-16页 |
| 1.1.3.4 新型的DNA改组 | 第16页 |
| 1.1.4 定向进化的其他方法 | 第16-17页 |
| 1.2 蛋白质突变体库的筛选方法 | 第17-22页 |
| 1.2.1 蛋白质突变体库的常规筛选方法 | 第17-18页 |
| 1.2.2 高通量筛选蛋白质突变体库的方法 | 第18-22页 |
| 1.2.2.1 噬菌体展示技术 | 第18页 |
| 1.2.2.2 微生物细胞表面展示技术 | 第18-20页 |
| 1.2.2.3 核糖体和mRNA展示技术 | 第20-22页 |
| 1.3 酶分子改造方法在酶改造中的应用 | 第22-23页 |
| 1.3.1 提高酶的热稳定性 | 第22页 |
| 1.3.2 改善酶的pH稳定性 | 第22-23页 |
| 1.3.3 提高酶的抗氧化稳定性 | 第23页 |
| 1.3.4 改进酶的有机溶剂耐受性 | 第23页 |
| 1.4 结语与展望 | 第23-24页 |
| 1.5 本论文研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 腈水解酶的分子改造 | 第26-42页 |
| 2.1 前言 | 第26-27页 |
| 2.2 材料与方法 | 第27-32页 |
| 2.2.1 材料 | 第27-28页 |
| 2.2.1.1 菌种与质粒 | 第27页 |
| 2.2.1.2 培养基 | 第27页 |
| 2.2.1.3 工具酶 | 第27页 |
| 2.2.1.4 试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.1.5 仪器 | 第28页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第28-32页 |
| 2.2.2.1 E. coli BL21(DE3)/ pET28b-NIT重组质粒的提取 | 第28页 |
| 2.2.2.2 突变质粒库的建立 | 第28-30页 |
| 2.2.2.3 酶切除去模板 | 第30页 |
| 2.2.2.4 大肠杆菌E. coli BL2 1 (DE3)感受态的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.2.5 E.coli BL21(DE3)感受态细胞的转化及抗性筛选 | 第31页 |
| 2.2.2.6 pH指示法高通量初筛 | 第31页 |
| 2.2.2.7 高效液相色谱复筛 | 第31-32页 |
| 2.2.2.8 正向突变腈水解酶序列测定 | 第32页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第32-40页 |
| 2.3.1 高通量筛选模型建立 | 第32-34页 |
| 2.3.2 点饱和突变 | 第34-40页 |
| 2.4 本章小结 | 第40-42页 |
| 第三章 腈水解酶的酶学性质研究及分子建模 | 第42-59页 |
| 3.1 前言 | 第42页 |
| 3.2 材料与方法 | 第42-46页 |
| 3.2.1 材料 | 第42-44页 |
| 3.2.1.1 菌种与质粒 | 第42-43页 |
| 3.2.1.2 培养基 | 第43页 |
| 3.2.1.3 试剂 | 第43页 |
| 3.2.1.4 仪器 | 第43-44页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第44-46页 |
| 3.2.2.1 腈水解酶纯酶的获得 | 第44页 |
| 3.2.2.2 检测方法的建立及酶活单位定义 | 第44页 |
| 3.2.2.3 最适pH和pH稳定性 | 第44-45页 |
| 3.2.2.4 最适温度和热稳定性 | 第45页 |
| 3.2.2.5 圆二色谱(CD) | 第45页 |
| 3.2.2.6 腈水解酶序列比对 | 第45-46页 |
| 3.2.2.7 同源建模及分子对接 | 第46页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第46-58页 |
| 3.3.1 腈水解酶纯酶的获得 | 第46-49页 |
| 3.3.2 pH对腈水解酶活力的影响 | 第49-51页 |
| 3.3.3 温度对腈水解酶活力的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.4 圆二色谱 | 第52-54页 |
| 3.3.5 序列结构比对 | 第54-56页 |
| 3.3.6 腈水解酶的同源建模及分子对接 | 第56-58页 |
| 3.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 第四章 腈水解酶突变株在扁桃酸生产中的应用 | 第59-72页 |
| 4.1 前言 | 第59-60页 |
| 4.2 材料与方法 | 第60-62页 |
| 4.2.1 材料 | 第60-61页 |
| 4.2.1.1 菌种与质粒 | 第60页 |
| 4.2.1.2 培养基 | 第60页 |
| 4.2.1.3 试剂 | 第60页 |
| 4.2.1.4 仪器 | 第60-61页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第61-62页 |
| 4.2.2.1 检测方法的建立及酶活单位定义 | 第61页 |
| 4.2.2.2 重组大肠杆菌的培养和诱导表达 | 第61页 |
| 4.2.2.3 菌体在催化条件下的稳定性 | 第61页 |
| 4.2.2.4 底物浓度对菌体活力的影响 | 第61-62页 |
| 4.2.2.5 催化进程研究 | 第62页 |
| 4.2.2.6 底物流加实验 | 第62页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第62-71页 |
| 4.3.1 菌体的稳定性研究 | 第62-64页 |
| 4.3.2 底物浓度对菌体活力的影响 | 第64-65页 |
| 4.3.3 催化进程研究 | 第65-67页 |
| 4.3.4 流加实验结果 | 第67-71页 |
| 4.3.4.1 底物快速流加实验 | 第67-69页 |
| 4.3.4.2 底物慢速流加实验 | 第69-71页 |
| 4.4 本章小结 | 第71-72页 |
| 第五章 结论与展望 | 第72-75页 |
| 5.1 结论 | 第72-74页 |
| 5.2 展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文情况 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
