| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 引言 | 第13-22页 |
| 1.1 ATR的概述 | 第13页 |
| 1.2 ATR的生态危害 | 第13-15页 |
| 1.2.1 ATR对水质的危害 | 第13-14页 |
| 1.2.2 ATR对水生生物的危害 | 第14页 |
| 1.2.3 ATR对陆生生物的危害 | 第14页 |
| 1.2.4 ATR对人类健康的危害 | 第14-15页 |
| 1.3 ATR的肝脏毒性 | 第15-16页 |
| 1.3.1 ATR对水生生物的肝脏毒性 | 第15页 |
| 1.3.2 ATR对陆生生物的肝脏毒性 | 第15-16页 |
| 1.3.3 ATR在肝脏的代谢 | 第16页 |
| 1.4 ATR的肝毒毒理学机制 | 第16-17页 |
| 1.4.1 ATR引起肝脏的大分子损伤 | 第16页 |
| 1.4.2 ATR导致肝脏的酶活性改变 | 第16-17页 |
| 1.4.3 ATR影响肝脏代谢 | 第17页 |
| 1.4.4 ATR的肝脏雌激素效应 | 第17页 |
| 1.5 ATR与氧化应激 | 第17-19页 |
| 1.5.1 氧化应激的概述 | 第17-18页 |
| 1.5.2 氧化应激的作用 | 第18页 |
| 1.5.3 氧化应激在ATR毒性中的作用 | 第18-19页 |
| 1.6 Nrf2信号通路与氧化应激 | 第19-21页 |
| 1.6.1 Nrf2概述 | 第19页 |
| 1.6.2 Keap1-Nrf2的调控机制 | 第19-20页 |
| 1.6.3 Nrf2抗氧化机制 | 第20页 |
| 1.6.4 Nrf2信号通路与ATR | 第20-21页 |
| 1.7 实验的目的与意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-33页 |
| 2.1 主要仪器和试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.2 鹌鹑Nrf2基因全序列的克隆 | 第23-26页 |
| 2.2.1 扩增引物设计与合成 | 第23页 |
| 2.2.2 组织中总RNA的抽提 | 第23页 |
| 2.2.3 RNA的反转录 | 第23-24页 |
| 2.2.4 基因PCR扩增及产物的检测 | 第24页 |
| 2.2.5 基因的克隆、鉴定及测序分析 | 第24-25页 |
| 2.2.6 鹌鹑Nrf2c DNA全基因序列拼接及氨基酸序列分析 | 第25页 |
| 2.2.7 鹌鹑Nrf2蛋白结构与功能分析 | 第25-26页 |
| 2.3 鹌鹑Nrf2多克隆抗体的制备 | 第26-27页 |
| 2.3.1 Nrf2多肽的制备 | 第26页 |
| 2.3.2 抗原乳剂的制备 | 第26页 |
| 2.3.3 动物接种与抗血清的收集 | 第26页 |
| 2.3.4 抗鹌鹑Nrf2多克隆抗体效价的测定 | 第26-27页 |
| 2.3.5 鹌鹑Nrf2多克隆抗体的特异性鉴定 | 第27页 |
| 2.4 动物试验 | 第27-28页 |
| 2.4.1 试验动物分组与处理 | 第27页 |
| 2.4.2 组织样品的采集与处理 | 第27页 |
| 2.4.3 鹌鹑肝脏病理变化观察 | 第27-28页 |
| 2.5 肝脏微粒体CYP450浓度的测定 | 第28页 |
| 2.5.1 肝微粒体制备 | 第28页 |
| 2.5.2 肝脏微粒体CYP450浓度的测定 | 第28页 |
| 2.6 肝脏组织中CYP450亚型mRNA表达水平的测定 | 第28-29页 |
| 2.7 试剂盒检测肝脏中SOD、CAT、GSH-Px活性及MDA、H_2O_2、GSH含量 | 第29-31页 |
| 2.7.1 SOD活性的测定 | 第30页 |
| 2.7.2 CAT活性的测定 | 第30页 |
| 2.7.3 GSH-PX活性的测定 | 第30页 |
| 2.7.4 MDA含量的测定 | 第30页 |
| 2.7.5 H_2O_2含量的测定 | 第30页 |
| 2.7.6 GSH含量的测定 | 第30-31页 |
| 2.8 Nrf2 mRNA及蛋白表达水平的测定 | 第31页 |
| 2.8.1 Nrf2 mRNA表达水平的测定 | 第31页 |
| 2.8.2 Nrf2蛋白表达水平的测定 | 第31页 |
| 2.9 Nrf2信号通路相关分子表达的测定 | 第31-32页 |
| 2.9.1 引物的设计与合成 | 第31-32页 |
| 2.9.2 实时定量RT-PCR扩增 | 第32页 |
| 2.10 试验数据的分析与统计 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-56页 |
| 3.1 鹌鹑Nrf2基因全序列的克隆 | 第33-41页 |
| 3.1.1 组织中总RNA的提取与鉴定 | 第33页 |
| 3.1.2 鹌鹑Nrf2基因引物的PCR扩增结果 | 第33页 |
| 3.1.3 鹌鹑Nrf2 cDNA全序列拼接及氨基酸序列预测结果 | 第33-35页 |
| 3.1.4 不同物种间Nrf2的多重序列比对结果 | 第35-36页 |
| 3.1.5 Nrf2结构与功能分析预测结果 | 第36-41页 |
| 3.2 多克隆抗体的制备和鉴定结果 | 第41-43页 |
| 3.2.1 Nrf2抗原多肽的制备 | 第41-42页 |
| 3.2.2 多克隆抗体的效价检测结果 | 第42-43页 |
| 3.2.3 多克隆抗体特异性的检测结果 | 第43页 |
| 3.3 鹌鹑体重及肝脏系数的测定结果 | 第43-45页 |
| 3.4 鹌鹑肝脏的病理学观察 | 第45-48页 |
| 3.4.1 鹌鹑肝脏病理组织学观察 | 第45-46页 |
| 3.4.2 鹌鹑肝脏超微结构观察 | 第46-48页 |
| 3.5 肝脏微粒体CYP450含量的测定结果 | 第48-49页 |
| 3.6 肝脏组织中CYP450亚型mRNA表达水平的测定结果 | 第49-51页 |
| 3.7 肝脏氧化应激相关指标的测定结果 | 第51-53页 |
| 3.7.1 MDA、H_2O_2、GSH含量的变化 | 第51-52页 |
| 3.7.2 SOD、CAT、GSH-Px活力的变化 | 第52-53页 |
| 3.8 Nrf2 mRNA及蛋白表达水平的测定结果 | 第53-55页 |
| 3.8.1 Nrf2 m RNA表达水平的测定结果 | 第53-54页 |
| 3.8.2 ATR对鹌鹑肝脏Nrf2蛋白表达影响的检测结果 | 第54-55页 |
| 3.9 NQO1和HO-1 mRNA水平的测定结果 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-63页 |
| 4.1 鹌鹑Nrf2基因克隆与抗体的制备 | 第56-57页 |
| 4.1.1 鹌鹑Nrf2全基因克隆及鉴定 | 第56页 |
| 4.1.2 鹌鹑Nrf2蛋白功能预测及多克隆抗体的制备 | 第56-57页 |
| 4.2 ATR致鹌鹑肝脏的病理损伤 | 第57-58页 |
| 4.2.1 ATR致鹌鹑体重的影响 | 第57页 |
| 4.2.2 ATR致鹌鹑肝脏重量的改变 | 第57页 |
| 4.2.3 ATR致鹌鹑肝脏组织形态学的损伤 | 第57-58页 |
| 4.3 ATR致鹌鹑肝脏CYP450酶系的影响 | 第58-59页 |
| 4.4 ATR诱发鹌鹑肝脏氧化应激 | 第59-60页 |
| 4.4.1 ATR对鹌鹑肝脏ROS及MDA含量的影响 | 第59页 |
| 4.4.2 ATR对鹌鹑肝脏抗氧化酶的影响 | 第59-60页 |
| 4.5 ATR对鹌鹑鹌鹑肝脏Nrf2信号通路的影响 | 第60-63页 |
| 4.5.1 ATR对肝脏Nrf2的影响 | 第60-61页 |
| 4.5.2 ATR对肝脏Nrf2通路的影响 | 第61-63页 |
| 5 结论 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-76页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学位论文 | 第76页 |
