| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词表 ABBREVIATIONS | 第8-13页 |
| 文献综述 | 第13-21页 |
| 1 丙型肝炎病毒概述 | 第13-17页 |
| 1.1 HCV历史 | 第13页 |
| 1.2 HCV流行病学 | 第13-14页 |
| 1.3 HCV感染 | 第14页 |
| 1.4 HCV基因结构及蛋白功能 | 第14-16页 |
| 1.5 HCV的病毒生命周期 | 第16-17页 |
| 2 HCV的药物治疗 | 第17-18页 |
| 3 影响HCV疫苗发展的免疫相关因素 | 第18-19页 |
| 3.1 抗HCV的体液免疫应答 | 第18-19页 |
| 3.2 抗HCV的细胞免疫应答 | 第19页 |
| 4 丙型肝炎核酸疫苗的研究概况 | 第19-21页 |
| 4.1 结构蛋白区核酸疫苗 | 第20页 |
| 4.2 非结构蛋白区核酸疫苗 | 第20-21页 |
| 选题意义 | 第21-22页 |
| 第一部分 丙型肝炎病毒核酸疫苗的构建 | 第22-49页 |
| 1 材料 | 第22-23页 |
| 1.1 毒株、细胞、质粒及菌株 | 第22页 |
| 1.2 主要生物试剂 | 第22页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第22-23页 |
| 1.4 实验仪器设备 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-39页 |
| 2.1 引物设计 | 第23-24页 |
| 2.2 RNA的提取与CDNA的合成 | 第24-25页 |
| 2.3 HCV CORE基因的真核表达载体构建 | 第25-29页 |
| 2.3.1 Core基因的PCR扩增 | 第25页 |
| 2.3.2 Core真核表达载体的构建 | 第25-28页 |
| 2.3.3 Core真核表达载体PCR鉴定 | 第28页 |
| 2.3.4 Core真核表达载体酶切鉴定 | 第28-29页 |
| 2.4 HCV NS3基因的真核表达载体构建 | 第29-32页 |
| 2.4.1 NS3基因的PCR扩增 | 第29页 |
| 2.4.2 NS3真核表达载体的构建 | 第29-31页 |
| 2.4.3 NS3真核表达载体PCR鉴定 | 第31页 |
| 2.4.4 NS3真核表达载体酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 2.5 HCVNS4B基因的真核表达载体构建 | 第32-34页 |
| 2.5.1 NS4B基因的PCR扩增 | 第32页 |
| 2.5.2 NS4B真核表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.5.3 NS4B真核表达载体PCR鉴定 | 第33-34页 |
| 2.5.4 NS4B真核表达载体酶切鉴定 | 第34页 |
| 2.6 HCV三基因真核表达载体的构建 | 第34-36页 |
| 2.6.1 三基因真核表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.6.2 HCV三基因融合真核表达载体酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 2.7 真核表达载体的体外表达 | 第36-39页 |
| 2.7.1 HepG2细胞培养 | 第36页 |
| 2.7.2 脂质体介导瞬时转染HepG2细胞 | 第36-37页 |
| 2.7.3 RT-PCR检测核酸水平上重组载体在细胞中的表达 | 第37-39页 |
| 3 结果 | 第39-47页 |
| 3.1 PVAX1-CORE真核表达载体构建 | 第39-41页 |
| 3.1.1 Core基因的PCR扩增 | 第39-40页 |
| 3.1.2 pVAX1-Core真核表达载体的PCR鉴定 | 第40页 |
| 3.1.3 pVAX1-Core真核表达载体的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2 pVAX1-NS3真核表达载体构建 | 第41-43页 |
| 3.2.1 NS3基因的PCR扩增 | 第41-42页 |
| 3.2.2 pVAX1-NS3真核表达载体的PCR鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.3 pVAX1-NS3真核表达载体的酶切鉴定 | 第43页 |
| 3.3 PVAX1-NS4B真核表达载体构建 | 第43-45页 |
| 3.3.1 NS4B基因的PCR扩增 | 第43-44页 |
| 3.3.2 pVAX1-NS4B真核表达载体的PCR鉴定 | 第44-45页 |
| 3.3.3 pVAX1-NS4B真核表达载体的酶切鉴定 | 第45页 |
| 3.4 PVAX1-NS3-CORE-NS4B真核表达载体构建 | 第45-46页 |
| 3.4.1 pVAX1-NS3-Core-NS4B真核表达载体的酶切鉴定 | 第45-46页 |
| 3.5 真核表达载体体外表达核酸水平检测结果 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-48页 |
| 4.1 目的基因的选择 | 第47-48页 |
| 4.2 表达载体的选择 | 第48页 |
| 5 小结 | 第48-49页 |
| 第二部分 丙型肝炎病毒核酸疫苗的免疫研究 | 第49-62页 |
| 1. 材料 | 第49页 |
| 1.1 毒株、细胞及质粒 | 第49页 |
| 1.2 实验动物及饲养管理 | 第49页 |
| 1.3 主要生物试剂 | 第49页 |
| 1.4 实验仪器设备 | 第49页 |
| 2. 方法 | 第49-52页 |
| 2.1 动物分组、免疫接种及采血 | 第49-50页 |
| 2.2 T淋巴细胞亚类CD3~+、CD4~+、CD8~+的检测 | 第50页 |
| 2.3 小鼠总IGG的检测 | 第50页 |
| 2.4 细胞因子检测(IL-2、IL-4、IFN-Γ) | 第50-51页 |
| 2.5 血清阻断病毒感染 | 第51页 |
| 2.6 数据统计分析 | 第51-52页 |
| 3. 结果 | 第52-60页 |
| 3.1 外周血T淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD8~+的检测结果 | 第52-54页 |
| 3.2 体液免疫相关细胞因子的检测结果 | 第54-56页 |
| 3.2.1 小鼠血清中总IgG检测结果 | 第54-55页 |
| 3.2.2 小鼠血清中IL4检测结果 | 第55-56页 |
| 3.3 细胞免疫相关细胞因子的检测结果 | 第56-58页 |
| 3.3.1 小鼠血清中IL2检测结果 | 第56-57页 |
| 3.3.2 小鼠血清中IFN-γ检测结果 | 第57-58页 |
| 3.4 血清阻断病毒感染实验结果 | 第58-60页 |
| 4. 讨论 | 第60-61页 |
| 5. 小结 | 第61-62页 |
| 全文结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附图 | 第68-69页 |
