| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 前言 | 第10-16页 |
| 1.1 植物先天免疫系统 | 第10-11页 |
| 1.2 MAPK信号通路研究进展 | 第11-14页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第14-15页 |
| 1.4 本研究技术路线 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-25页 |
| 2.1 材料与溶液配置 | 第16-19页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第16页 |
| 2.1.2 本实验所用菌株及载体 | 第16页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.4 溶液及培养基配方 | 第16-17页 |
| 2.1.5 原生质体提取与转化所用试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.6 转基因木薯所用培养基 | 第18-19页 |
| 2.1.7 引物序列 | 第19页 |
| 2.2 试验方法 | 第19-24页 |
| 2.2.1 木薯生物信息学分析 | 第19-20页 |
| 2.2.2 木薯启动子分析 | 第20页 |
| 2.2.3 载体构建 | 第20-21页 |
| 2.2.4 实时荧光定量检测基因表达模式 | 第21页 |
| 2.2.5 拟南芥原生质体提取及亚细胞定位 | 第21页 |
| 2.2.6 木薯原生质体的提取及RNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.7 拟南芥同源基因缺失突变体的遗传互补 | 第22页 |
| 2.2.8 转基因拟南芥的获得及鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.9 转基因拟南芥植株的抗病性检测 | 第23页 |
| 2.2.10 转基因植株的生理生化指标测定 | 第23页 |
| 2.2.11 酵母双杂交系统筛选MeMAPK1、MeMAPK8互作蛋白 | 第23-24页 |
| 2.2.12 MAPK激酶原核表达 | 第24页 |
| 2.3 转基因木薯的获得与分子鉴定 | 第24-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-44页 |
| 3.1 MeMAPK1、MeMAPK8的生物学分析 | 第25-26页 |
| 3.2 MeMAPK1、MeMAPK8的启动子分析 | 第26-27页 |
| 3.3 MeMAPK1和MeMAPK8基因全长cDNA序列的分离 | 第27-28页 |
| 3.4 序列测序与分析 | 第28-30页 |
| 3.5 载体的构建 | 第30-32页 |
| 3.5.1 植物转化载体的构建 | 第30页 |
| 3.5.2 原生质体瞬时表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 3.5.3 原核表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 3.5.4 酵母双杂交载体的构建 | 第32页 |
| 3.6 木薯RNA的提取及反转录 | 第32-33页 |
| 3.7 MeMAPK1及MeMAPK8基因的表达分析 | 第33-36页 |
| 3.7.1 组织特异性表达分析 | 第33页 |
| 3.7.2 MeMAPK1及MeMAPK8基因受到激素诱导表达 | 第33-34页 |
| 3.7.3 MeMAPK1及MeMAPK8基因受到非生物胁迫诱导表达 | 第34-36页 |
| 3.8 MeMAPK1和MeMAPK8基因的亚细胞定位 | 第36页 |
| 3.9 转基因拟南芥的获得及表达检测 | 第36-38页 |
| 3.9.1 转农杆菌转化子的鉴定 | 第36-37页 |
| 3.9.2 沾花法侵染拟南芥 | 第37页 |
| 3.9.3 TO代转基因植株的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.10 转基因拟南芥抗病表型鉴定 | 第38-39页 |
| 3.11 转基因拟南芥生理生化指标测定 | 第39-40页 |
| 3.11.1 ROS的测定 | 第39页 |
| 3.11.2 胼胝质沉积 | 第39-40页 |
| 3.12 MeMAPK1能够激活拟南芥突变体的PTI反应 | 第40-41页 |
| 3.13 酵母双杂交筛选互作蛋白 | 第41-42页 |
| 3.13.1 pGBD-MeMAPK1、pGBD-MeMAPK8表达检测与自激活 | 第41页 |
| 3.13.2 木薯cDNA文库的筛选 | 第41-42页 |
| 3.14 GST融合蛋白的原核表达分析 | 第42-43页 |
| 3.14.1 MeMAPK1-GST、MeMAPK8-GST融合蛋白表达 | 第42-43页 |
| 3.15 转基因木薯的遗传转化 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 4.1 MeMAPK1、MeMAPK8是蛋白激酶 | 第44-45页 |
| 4.2 MeMAPK1和MeMAPK8基因的缺失与植株抗病性关系 | 第45页 |
| 4.3 酵母双杂交技术筛选与目的蛋白互作蛋白 | 第45-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 附录 | 第53-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
| 本研究资助来自基金项目 | 第64页 |
| 硕士期间发表论文 | 第64页 |
