| 论文创新点 | 第5-10页 |
| 摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 第一章 前言 | 第18-42页 |
| 1.1 蝎与蝎毒素 | 第18-21页 |
| 1.1.1 引言 | 第18页 |
| 1.1.2 蝎的形态和种类 | 第18-19页 |
| 1.1.3 蝎毒素的种类和应用价值 | 第19-20页 |
| 1.1.4 小结 | 第20-21页 |
| 1.2 丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第21-29页 |
| 1.2.1 引言 | 第21-22页 |
| 1.2.2 丝氨酸蛋白酶抑制剂的功能和分类 | 第22-26页 |
| 1.2.3 毒液动物丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第26-27页 |
| 1.2.4 丝氨酸蛋白酶抑制剂的应用前景 | 第27-28页 |
| 1.2.5 丝氨酸蛋白酶抑制剂在神经胶质瘤中的研究进展 | 第28-29页 |
| 1.2.6 小结 | 第29页 |
| 1.3 神经胶质瘤 | 第29-37页 |
| 1.3.1 引言 | 第29-30页 |
| 1.3.2 神经胶质瘤的流行病学 | 第30-34页 |
| 1.3.3 神经胶质瘤的治疗 | 第34-37页 |
| 1.3.4 小结 | 第37页 |
| 1.4 蝎毒素在神经胶质瘤治疗中的研究进展 | 第37-41页 |
| 1.4.1 引言 | 第37-38页 |
| 1.4.2 蝎毒素在肿瘤治疗中的研究进展 | 第38-39页 |
| 1.4.3 蝎毒素在神经胶质瘤治疗中的研究进展 | 第39-40页 |
| 1.4.4 小结 | 第40-41页 |
| 1.5 本研究工作的出发点 | 第41-42页 |
| 第二章 Sj7170基因的分离、表达与纯化 | 第42-59页 |
| 2.1 引言 | 第42-43页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第43-45页 |
| 2.2.1 质粒和菌株 | 第43页 |
| 2.2.2 试剂盒 | 第43页 |
| 2.2.3 试剂 | 第43-44页 |
| 2.2.4 溶液配制 | 第44-45页 |
| 2.2.5 仪器和设备 | 第45页 |
| 2.2.6 生物学数据库和软件 | 第45页 |
| 2.3 实验方法 | 第45-52页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第45-46页 |
| 2.3.2 重组表达载体pET-28a-Sj7170的构建 | 第46-50页 |
| 2.3.3 Sj7170多肽的诱导表达和纯化 | 第50-52页 |
| 2.4 实验结果 | 第52-57页 |
| 2.4.1 Sj7170的序列分析 | 第52-54页 |
| 2.4.2 重组表达载体pET-28a-Sj7170的构建 | 第54-55页 |
| 2.4.3 重组Sj7170多肽的表达纯化与鉴定 | 第55-57页 |
| 2.5 讨论 | 第57-59页 |
| 第三章 Sj7170多肽对体内外蛋白酶抑制活性研究 | 第59-69页 |
| 3.1 引言 | 第59-60页 |
| 3.2 实验材料和仪器 | 第60-61页 |
| 3.2.1 细胞系 | 第60页 |
| 3.2.2 试剂及配制 | 第60页 |
| 3.2.3 仪器和设备 | 第60-61页 |
| 3.3 实验方法 | 第61-65页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第61-62页 |
| 3.3.2 体外丝氨酸蛋白酶抑制活性测定方法 | 第62-64页 |
| 3.3.3 体内丝氨酸蛋白酶抑制活性测定方法 | 第64-65页 |
| 3.4 实验结果 | 第65-67页 |
| 3.4.1 体外重组Sj7170蛋白抑制活性鉴定 | 第65-67页 |
| 3.4.2 体内重组Sj7170蛋白抑制活性鉴定 | 第67页 |
| 3.5 讨论 | 第67-69页 |
| 第四章 Sj7170多肽促神经胶质瘤U87和U251细胞体外增殖作用研究 | 第69-94页 |
| 4.1 引言 | 第69-70页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第70-72页 |
| 4.2.1 细胞系 | 第70页 |
| 4.2.2 试剂及其配制 | 第70-71页 |
| 4.2.3 抗体 | 第71页 |
| 4.2.4 试剂盒 | 第71页 |
| 4.2.5 仪器和设备 | 第71-72页 |
| 4.2.6 生物学软件 | 第72页 |
| 4.3 实验方法 | 第72-81页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第72页 |
| 4.3.2 细胞增殖计数法 | 第72页 |
| 4.3.3 细胞周期分析 | 第72-73页 |
| 4.3.4 软琼脂克隆形成 | 第73页 |
| 4.3.5 Western Blot检测 | 第73-76页 |
| 4.3.6 细胞总RNA的提取和检测 | 第76页 |
| 4.3.7 RNA样品的cDNA合成 | 第76-77页 |
| 4.3.8 实时定量PCR | 第77-78页 |
| 4.3.9 CyclinD1下调稳转U87细胞的建立 | 第78-81页 |
| 4.3.10 Cofocol检测多肽Sj7170的定位 | 第81页 |
| 4.4 实验结果 | 第81-91页 |
| 4.4.1 Sj7170促进U87和U251细胞增殖 | 第81-85页 |
| 4.4.2 Sj7170促进U87细胞克隆形成 | 第85页 |
| 4.4.3 Sj7170对U87细胞周期的影响 | 第85-88页 |
| 4.4.4 CyclinD1下调稳转细胞系的构建 | 第88-89页 |
| 4.4.5 Sj7170对CyclinD1下调细胞系增殖的影响 | 第89-90页 |
| 4.4.6 Sj7170在U87细胞中的亚细胞定位 | 第90-91页 |
| 4.5 讨论 | 第91-94页 |
| 第五章 Sj7170多肽促神经胶质瘤U87细胞体内增殖作用研究 | 第94-101页 |
| 5.1 引言 | 第94页 |
| 5.2 实验材料和仪器 | 第94-95页 |
| 5.2.1 细胞系和实验动物 | 第94-95页 |
| 5.2.2 试剂和材料 | 第95页 |
| 5.3 实验方法 | 第95-96页 |
| 5.3.1 裸鼠皮下成瘤动物模型的建立 | 第95页 |
| 5.3.2 裸鼠肿瘤组织和的获取 | 第95-96页 |
| 5.3.3 组织切片 | 第96页 |
| 5.3.4 实时定量PCR和Western blot检测 | 第96页 |
| 5.4 实验结果 | 第96-99页 |
| 5.4.1 Sj7170促进裸鼠体内瘤组织的生长 | 第96-97页 |
| 5.4.2 免疫组化检测肿瘤组织中CyclinD1的表达 | 第97-98页 |
| 5.4.3 体外检测肿瘤组织中CyclinD1基因的表达水平 | 第98-99页 |
| 5.5 讨论 | 第99-101页 |
| 第六章 Sj7170多肽促神经胶质瘤U87和U251细胞迁移和侵袭效应研究 | 第101-123页 |
| 6.1 引言 | 第101页 |
| 6.2 实验材料和仪器 | 第101-102页 |
| 6.2.1 细胞系 | 第101-102页 |
| 6.2.2 试剂及其配制 | 第102页 |
| 6.2.3 试剂盒及仪器 | 第102页 |
| 6.3 实验方法 | 第102-108页 |
| 6.3.1 细胞培养 | 第102-103页 |
| 6.3.2 细胞划痕实验 | 第103页 |
| 6.3.3 细胞体外迁移实验 | 第103-104页 |
| 6.3.4 细胞体外侵袭实验 | 第104-105页 |
| 6.3.5 Western blot检测 | 第105页 |
| 6.3.6 实时定量PCR | 第105-106页 |
| 6.3.7 MMP2和MMP9蛋白的ELISA检测 | 第106-107页 |
| 6.3.8 免疫荧光分析 | 第107页 |
| 6.3.9 Snail下调稳转U87和U251细胞的建立 | 第107-108页 |
| 6.4 实验结果 | 第108-120页 |
| 6.4.1 Sj7170促进U87和U251细胞的迁移和侵袭 | 第108-111页 |
| 6.4.2 Sj7170诱导细胞EMT过程的发生 | 第111-117页 |
| 6.4.3 Sj7170对cyclinD1下调细胞系迁移和侵袭的影响 | 第117-119页 |
| 6.4.4 Sj7170促使U87细胞形态发生变化 | 第119页 |
| 6.4.5 Sj7170促使U87细胞骨架发生重排 | 第119-120页 |
| 6.5 讨论 | 第120-123页 |
| 第七章 Sj7170多肽的蛋白酶抑制活性与促神经胶质瘤生长和转移作用的关系研究 | 第123-135页 |
| 7.1 引言 | 第123-124页 |
| 7.2 实验材料和仪器 | 第124-125页 |
| 7.2.1 细胞系 | 第124页 |
| 7.2.2 试剂及其配制 | 第124页 |
| 7.2.3 试剂盒及仪器 | 第124-125页 |
| 7.3 实验方法 | 第125-128页 |
| 7.3.1 Sj7170定点突变与鉴定 | 第125-127页 |
| 7.3.2 Sj7170突变体的体外丝氨酸蛋白酶抑制活性测定 | 第127页 |
| 7.3.3 Sj7170突变体对细胞形态和增殖的影响 | 第127-128页 |
| 7.3.4 Sj7170突变体对细胞迁移的影响 | 第128页 |
| 7.4 实验结果 | 第128-133页 |
| 7.4.1 Chymostatin对U87细胞形态和增殖的影响 | 第128-129页 |
| 7.4.2 Sj7170突变体二级结构的测定 | 第129-130页 |
| 7.4.3 Sj7170突变体体外酶抑制活性的测定 | 第130-131页 |
| 7.4.4 Sj7170突变体对U87细胞增殖的影响 | 第131-132页 |
| 7.4.5 Sj7170突变体对U87细胞迁移的影响 | 第132-133页 |
| 7.5 讨论 | 第133-135页 |
| 研究总结与展望 | 第135-137页 |
| 参考文献 | 第137-150页 |
| 博士研究生期间发表及待发表的论文 | 第150-151页 |
| 致谢 | 第151-152页 |
