缩略语表 | 第6-8页 |
中文摘要 | 第8-11页 |
ABSTRACT | 第11-14页 |
前言 | 第15-17页 |
文献回顾 | 第17-32页 |
实验一 TGF-β1 信号通路对睾丸间质细胞CYP19基因相关转录因子表达的影响 | 第32-53页 |
1 材料 | 第32-37页 |
1.1 实验动物 | 第32-33页 |
1.2 实验细胞 | 第33页 |
1.3 实验主要试剂 | 第33-35页 |
1.4 实验主要自配缓冲液和试剂 | 第35-36页 |
1.5 实验主要仪器 | 第36-37页 |
2 方法 | 第37-45页 |
2.1 原代大鼠睾丸间质细胞的分离纯化 | 第37-39页 |
2.2 细胞处理 | 第39页 |
2.3 动物处理 | 第39-40页 |
2.4 组织固定、包埋、切片 | 第40页 |
2.5 蛋白提取及定量 | 第40-42页 |
2.6 Western Blot | 第42-43页 |
2.7 免疫荧光细胞染色 | 第43页 |
2.8 免疫荧光组织化学双标染色 | 第43-44页 |
2.9 睾丸间质液雌二醇含量检测 | 第44页 |
2.10 统计学分析 | 第44-45页 |
3 结果 | 第45-51页 |
3.1 TGF-β1 对大鼠睾丸间质细胞Cyp19基因转录因子表达的影响 | 第45-48页 |
3.2 TGF-β1 受体ALK5在调控SF-1 和LRH-1 表达中的作用 | 第48-51页 |
3.3 Smad2在TGF-β1 作用下明显激活 | 第51页 |
4 讨论 | 第51-53页 |
实验二 TGF-β1 信号通路对CYP19基因启动子转录活性的影响 | 第53-61页 |
1 材料 | 第53-55页 |
1.1 实验细胞 | 第53页 |
1.2 实验主要试剂 | 第53-54页 |
1.3 实验所用质粒(西安东澳生物协助构建) | 第54页 |
1.4 实验主要自配缓冲液和试剂 | 第54页 |
1.5 实验主要仪器 | 第54-55页 |
2 方法 | 第55-58页 |
2.1 质粒提取 | 第55-56页 |
2.2 细胞转染 | 第56-57页 |
2.3 双荧光素酶报告基因实验 | 第57-58页 |
2.4 统计学分析 | 第58页 |
3 结果 | 第58-59页 |
3.1 TGF-β1 对SF-1/LRH-1 诱导下Cyp19基因启动子转录活性的影响 | 第58页 |
3.2 Smad2对SF-1/LRH-1 诱导下Cyp19基因启动子转录活性的影响 | 第58-59页 |
4 讨论 | 第59-61页 |
实验三 MIRNA参与TGF-β1 对CYP19基因和SF-1/LRH-1 表达的调节 | 第61-72页 |
1 材料 | 第61-63页 |
1.1 实验细胞及处理 | 第61页 |
1.2 实验主要试剂 | 第61-62页 |
1.3 实验所用引物 | 第62页 |
1.4 实验主要仪器 | 第62-63页 |
2 方法 | 第63-66页 |
2.1 总RNA提取 | 第63页 |
2.2 miRNA表达谱测序分析 | 第63-64页 |
2.3 miRNA逆转录 | 第64-65页 |
2.4 Quantitative reverse transcription PCR (qRT-PCR) | 第65页 |
2.5 统计学分析 | 第65-66页 |
3 结果 | 第66-69页 |
3.1 R2C细胞小RNA序列分析 | 第66-67页 |
3.2 TGF-β1 作用下表达差异显著的miRNA及其靶基因功能分析 | 第67-68页 |
3.3 以SF-1 或LRH-1 为靶基因的miRNA的表达变化 | 第68-69页 |
4 讨论 | 第69-72页 |
小结 | 第72-73页 |
参考文献 | 第73-84页 |
个人简历和研究成果 | 第84-86页 |
致谢 | 第86页 |