| 内容提要 | 第4-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-37页 |
| 1.1 研究目的、意义及内容 | 第9-12页 |
| 1.1.1 研究目的 | 第9-10页 |
| 1.1.2 研究意义 | 第10-11页 |
| 1.1.3 研究内容 | 第11-12页 |
| 1.2 人参皂苷的生物合成 | 第12-20页 |
| 1.2.1 人参皂苷生物合成步骤 | 第12-15页 |
| 1.2.2 人参皂苷生物合成关键酶基因 | 第15-19页 |
| 1.2.3 人参皂苷生物合成调控 | 第19-20页 |
| 1.3 植物发根研究进展 | 第20-23页 |
| 1.3.1 发根的诱导 | 第20-21页 |
| 1.3.2 发根的研究热点 | 第21-23页 |
| 1.3.3 人参发根的研究现状 | 第23页 |
| 1.4 茉莉酸甲酯的研究进展 | 第23-26页 |
| 1.4.1 茉莉酸甲酯的化学结构 | 第24-25页 |
| 1.4.2 茉莉酸甲酯的功能 | 第25-26页 |
| 1.5 半定量RT-PCR技术的研究及应用 | 第26-27页 |
| 1.5.1 半定量RT-PCR技术的步骤 | 第26-27页 |
| 1.5.2 半定量RT-PCR技术的应用 | 第27页 |
| 1.6 异源表达系统的选择 | 第27-37页 |
| 1.6.1 大肠杆菌表达系统 | 第27-29页 |
| 1.6.2 酵母基因表达系统 | 第29-33页 |
| 1.6.3 枯草芽孢杆菌基因表达系统 | 第33-34页 |
| 1.6.4 昆虫细胞基因表达系统 | 第34-35页 |
| 1.6.5 哺乳动物细胞表达系统 | 第35-37页 |
| 第2章 MeJA对人参发根皂苷含量的影响 | 第37-51页 |
| 2.1 实验材料 | 第37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-40页 |
| 2.2.1 人参发根的培养 | 第37-38页 |
| 2.2.2 人参总皂苷的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.3 人参总皂苷含量的测定 | 第39页 |
| 2.2.4 人参单体皂苷含量的测定 | 第39-40页 |
| 2.3 结果与分析 | 第40-49页 |
| 2.3.1 人参发根生长曲线的绘制 | 第40页 |
| 2.3.2 总皂苷标准曲线的绘制 | 第40-41页 |
| 2.3.3 总皂苷含量的测定 | 第41-42页 |
| 2.3.4 单体皂苷标准曲线的绘制 | 第42-48页 |
| 2.3.5 单体皂苷含量的测定 | 第48-49页 |
| 2.4 讨论 | 第49-50页 |
| 2.5 小结 | 第50-51页 |
| 第3章 MeJA对人参DS基因表达的影响 | 第51-65页 |
| 3.1 实验材料 | 第51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-55页 |
| 3.2.1 总RNA的提取 | 第51-52页 |
| 3.2.2 引物的合成 | 第52-53页 |
| 3.2.3 RT-PCR | 第53-54页 |
| 3.2.4 RT-PCR反应条件的确定 | 第54-55页 |
| 3.2.5 电泳检测方法 | 第55页 |
| 3.3 结果与分析 | 第55-62页 |
| 3.3.1 人参发根总RNA的提取 | 第55-56页 |
| 3.3.2 DS合成酶基因扩增 | 第56-57页 |
| 3.3.3 半定量RT-PCR条件的优化 | 第57-61页 |
| 3.3.4 MeJA诱导人参发根DS基因的差异表达 | 第61-62页 |
| 3.4 讨论 | 第62-64页 |
| 3.4.1 RNA提取 | 第62-63页 |
| 3.4.2 半定量RT-PCR条件的优化 | 第63页 |
| 3.4.3 MeJA诱导人参发根DS基因的差异表达 | 第63-64页 |
| 3.5 小结 | 第64-65页 |
| 第4章 DS基因在酿酒酵母中的表达 | 第65-91页 |
| 4.1 实验材料 | 第66页 |
| 4.2 实验方法 | 第66-75页 |
| 4.2.1 RNA的提取、反转录、PCR | 第66页 |
| 4.2.2 PCR产物的回收 | 第66-67页 |
| 4.2.3 PCR产物的加尾及纯化 | 第67-68页 |
| 4.2.4 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第68-69页 |
| 4.2.5 克隆载体的构建 | 第69页 |
| 4.2.6 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第69页 |
| 4.2.7 碱法小量提取质粒DNA | 第69-70页 |
| 4.2.8 质粒DNA的酶切鉴定 | 第70-71页 |
| 4.2.9 表达载体的构建 | 第71页 |
| 4.2.10 感受态酿酒酵母的制备 | 第71-72页 |
| 4.2.11 酿酒酵母的转染和鉴定 | 第72-73页 |
| 4.2.12 酿酒酵母蛋白的提取 | 第73页 |
| 4.2.13 SDS-PAGE蛋白电泳检测表达产物 | 第73-74页 |
| 4.2.14 重组菌遗传稳定性检测 | 第74页 |
| 4.2.15 达玛烯二醇的提取 | 第74-75页 |
| 4.2.16 达玛烯二醇含量的测定 | 第75页 |
| 4.3 结果与分析 | 第75-85页 |
| 4.3.1 克隆载体的酶切和质粒测序 | 第75-77页 |
| 4.3.2 测序结果分析 | 第77-78页 |
| 4.3.3 表达载体的构建及酶切鉴定 | 第78-80页 |
| 4.3.4 酿酒酵母生长曲线的绘制 | 第80页 |
| 4.3.5 酿酒酵母的转染和鉴定 | 第80-81页 |
| 4.3.6 酵母表达蛋白的SDS-PAGE检测 | 第81-82页 |
| 4.3.7 重组菌遗传稳定性检测 | 第82-83页 |
| 4.3.8 达玛烯二醇含量的测定 | 第83-85页 |
| 4.4 讨论 | 第85-89页 |
| 4.4.1 克隆载体构建 | 第85-86页 |
| 4.4.2 表达载体构建 | 第86页 |
| 4.4.3 重组工程菌的构建 | 第86-87页 |
| 4.4.4 酿酒酵母表达蛋白的检测 | 第87-88页 |
| 4.4.5 重组菌遗传稳定性检测 | 第88-89页 |
| 4.4.6 达玛烯二醇含量的测定 | 第89页 |
| 4.5 小结 | 第89-91页 |
| 第5章 全文总结与展望 | 第91-93页 |
| 5.1 总结 | 第91-92页 |
| 5.2 展望 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-111页 |
| 英文缩写 | 第111-112页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文及参加的科研项目 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 中文摘要 | 第114-116页 |
| Abstract | 第116-118页 |
