| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 文献综述 | 第13-26页 |
| 一、核盘菌概述 | 第13-16页 |
| 1. 核盘菌简介 | 第13-14页 |
| 2. 核盘菌的研究意义 | 第14页 |
| 3. 核盘菌的生物学及防治研究进展 | 第14-16页 |
| 二、MADS-box 转录因子研究概述 | 第16-19页 |
| 1. 转录因子简介 | 第16页 |
| 2. 转录因子研究意义 | 第16页 |
| 3. MADS-box 家族转录因子研究进展 | 第16-19页 |
| 三、亚细胞定位的研究意义与方法 | 第19-20页 |
| 1. 亚细胞定位的研究意义 | 第19页 |
| 2. 亚细胞定位的主要方法 | 第19-20页 |
| 四、真核生物蛋白质间相互作用的研究意义与方法 | 第20-24页 |
| 1. 真核生物蛋白质间相互作用研究的意义 | 第20-21页 |
| 2. 真核生物蛋白间相互作用的研究方法 | 第21-24页 |
| 五、本研究的目的与意义 | 第24-26页 |
| 第一章 SsMADS1 基因克隆原核表达、纯化及抗血清制备 | 第26-45页 |
| 1 实验材料 | 第26-28页 |
| 1.1 菌株及载体 | 第26页 |
| 1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 1.3 主要培养基与试剂配制 | 第27-28页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第28页 |
| 2 实验方法 | 第28-38页 |
| 2.1 SsMADS1 基因的克隆 | 第28-33页 |
| 2.2 SsMADS1 基因的原核表达 | 第33-36页 |
| 2.3 抗血清制备与效价测定 | 第36-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-43页 |
| 3.1 PCR 扩增 SsMADS1 结果 | 第38页 |
| 3.2 pMD18-T::SsMADS1 重组质粒的验证 | 第38-39页 |
| 3.3 核盘菌 SsMADS1 基因测序与分析 | 第39-40页 |
| 3.4 重组质粒 pET28a::SsMADS1 的验证 | 第40页 |
| 3.5 SsMADS1 融合蛋白的原核表达与亲和纯化 | 第40-41页 |
| 3.6 效价测定 | 第41-43页 |
| 4 小结与讨论 | 第43-45页 |
| 第二章 核盘菌 SsMADS1 的亚细胞定位分析 | 第45-54页 |
| 1 实验材料 | 第45-46页 |
| 1.1 菌株及载体 | 第45页 |
| 1.2 主要试剂 | 第45页 |
| 1.3 主要培养基与试剂配制 | 第45-46页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第46页 |
| 2 实验方法 | 第46-49页 |
| 2.1 SsMADS1 基因亚细胞定位特异性引物的设计和合成 | 第46页 |
| 2.2 SsMADS1 亚细胞定位生物信息学分析 | 第46页 |
| 2.3 pCG-1301::SsMADS1 载体的构建与鉴定 | 第46-47页 |
| 2.4 农杆菌 EHA105 感受态细胞的制备及转化 | 第47页 |
| 2.5 农杆菌介导侵染烟草 | 第47-48页 |
| 2.6 Western-blot 分析 | 第48-49页 |
| 3 结果与分析 | 第49-52页 |
| 3.1 重组质粒 pCG-1301::SsMADS1 的验证 | 第49-50页 |
| 3.2 SsMADS1 亚细胞定位生物信息学分析 | 第50页 |
| 3.3 蛋白质提取检测 | 第50-51页 |
| 3.4 荧光亚细胞定位检测 | 第51-52页 |
| 4 小结与讨论 | 第52-54页 |
| 第三章 His Pull-down 筛选 SsMADS1 互作蛋白 | 第54-65页 |
| 1 实验材料 | 第54-55页 |
| 1.1 菌株 | 第54页 |
| 1.2 主要试剂 | 第54页 |
| 1.3 主要培养基与试剂配制 | 第54-55页 |
| 1.4 主要实验仪器 | 第55页 |
| 2 实验方法 | 第55-57页 |
| 2.1 SsMADS1 互作蛋白生物信息学分析 | 第55页 |
| 2.2 核盘菌总蛋白的提取 | 第55-56页 |
| 2.3 His pull-down 筛选 SsMADS1 互作蛋白 | 第56页 |
| 2.4 SDS-PAGE 凝胶电泳与银染 | 第56-57页 |
| 2.5 质谱分析 | 第57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-63页 |
| 3.1 核盘菌总蛋白的提取 | 第57页 |
| 3.2 SsMADS1 的 pfam 分析 | 第57-58页 |
| 3.3 SsMADS1 的 Domine 分析 | 第58-60页 |
| 3.4 SsMADS1 的 STRING 分析 | 第60-63页 |
| 3.5 His-tag pull-down 筛选 SsMADS1 互作蛋白 | 第63页 |
| 4 小结与讨论 | 第63-65页 |
| 第四章 酵母双杂交 BD 载体的构建 | 第65-72页 |
| 1 实验材料 | 第65-66页 |
| 1.1 菌株与载体 | 第65页 |
| 1.2 主要试剂 | 第65页 |
| 1.3 主要培养基和溶液配制 | 第65-66页 |
| 2 实验方法 | 第66-67页 |
| 2.1 SsMADS1 基因诱饵载体特异性引物的设计和合成 | 第66页 |
| 2.2 pGBKT7::SsMADS1 载体的构建与鉴定 | 第66页 |
| 2.3 诱饵蛋白对酵母细胞的毒性 | 第66页 |
| 2.4 诱饵蛋白自激活验证 | 第66页 |
| 2.5 诱饵蛋白在酵母细胞中的表达检测 | 第66页 |
| 2.6 3-AT 浓度的优化 | 第66-67页 |
| 3 结果与分析 | 第67-70页 |
| 3.1 重组质粒 pGBKT7::SsMADS1 的验证 | 第67-68页 |
| 3.2 pGBKT7::SsMADS1 毒性检测 | 第68页 |
| 3.3 pGBKT7::SsMADS1 酵母蛋白表达检测 | 第68-69页 |
| 3.4 pGBKT7::SsMADS1 菌株的 3-AT 筛选 | 第69-70页 |
| 3.5 pGBKT7::SsMADS1 的自激活检测 | 第70页 |
| 4 小结与讨论 | 第70-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-82页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
