| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-16页 |
| 1 引言 | 第16-43页 |
| ·哺乳动物毛色形成的遗传机制 | 第16-18页 |
| ·马的毛色及形成机制 | 第18-20页 |
| ·与毛色形成有关的毛色基因 | 第20-31页 |
| ·黑色素皮质激素受体1（Melanocortin 1 receptor，MC1R）基因 | 第20-22页 |
| ·野灰位点信号蛋白（Agouti-signalling Protein，ASIP）基因 | 第22-24页 |
| ·原癌（Proto-oncogene c-kit，KIT）基因 | 第24-27页 |
| ·酪氨酸酶关联蛋白家族（Tyrosinase-related Protein，TYRP）基因 | 第27-29页 |
| ·内皮素受体 B（Endothelins Receptor B，EDNRB）基因 | 第29-30页 |
| ·突触融合蛋白17（Syntaxin-17，STX17）基因 | 第30页 |
| ·膜相关转运蛋白(Membrane-associated transporter protein,MATP)基因 | 第30-31页 |
| ·前黑色素体蛋白（Pre-melanosomal protein 17，PMEL17）基因 | 第31页 |
| ·毛色遗传研究常用理论与技术手段 | 第31-40页 |
| ·基因间互作效应分析方法 | 第31-32页 |
| ·限制性酶切片段长度多态性 | 第32-33页 |
| ·扩增片段长度多态性 | 第33页 |
| ·单链构象多态性 | 第33-34页 |
| ·巢式 PCR 技术 | 第34页 |
| ·实时荧光定量 PCR（Real-time Quantitative PCR，QRT-PCR） | 第34-38页 |
| ·酶联免疫吸附剂测定 | 第38-39页 |
| ·蛋白免疫印迹技术 | 第39-40页 |
| ·本研究的目的、意义及主要研究内容 | 第40-43页 |
| ·蒙古马毛色遗传研究的意义 | 第40-41页 |
| ·本研究的主要内容与技术路线 | 第41-43页 |
| 2 实验一 蒙古马MC1R 基因、ASIP 基因、TYRP1 基因、STX17 基因的多态性检测及与毛色表型相关性分析 | 第43-73页 |
| ·实验材料 | 第43-47页 |
| ·实验样品 | 第43-44页 |
| ·仪器设备 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44-46页 |
| ·菌株和克隆载体 | 第46页 |
| ·主要试剂和溶液的配制 | 第46-47页 |
| ·主要分子生物学软件及相关网站 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-56页 |
| ·血液基因组 DNA 的提取 | 第47-48页 |
| ·PCR 反应体系及过程 | 第48-50页 |
| ·各基因多态性检测方法 | 第50-52页 |
| ·不同基因型的克隆与测序 | 第52-54页 |
| ·基因多态参数的统计分析方法 | 第54-56页 |
| ·结果与分析 | 第56-65页 |
| ·血液基因组 DNA 提取结果 | 第56页 |
| ·各引物的 PCR 扩增结果 | 第56-57页 |
| ·各基因的分型结果 | 第57-59页 |
| ·重组质粒的筛选和鉴定结果 | 第59页 |
| ·不同基因型重组质粒的测序结果分析 | 第59-61页 |
| ·各基因多态位点群体遗传学分析 | 第61-64页 |
| ·各基因多态位点与毛色表型相关性分析 | 第64-65页 |
| ·讨论 | 第65-73页 |
| ·MC1R 基因多态性与毛色表型的分析 | 第65-67页 |
| ·ASIP 基因多态性与毛色表型的分析 | 第67-68页 |
| ·TYRP1 基因多态性与毛色表型的分析 | 第68-69页 |
| ·MC1R 基因、ASIP 基因、TYRP1 基因三者间的互作关系 | 第69页 |
| ·STX17 基因多态性与毛色表型关系 | 第69-70页 |
| ·内含子在基因表达中的重要作用 | 第70-71页 |
| ·蒙古马毛色基因各多态位点的群体遗传学分析 | 第71-73页 |
| 3 实验二 蒙古马MC1R 与ASIP 基因对皮肤反射系数影响的遗传效应剖分 | 第73-82页 |
| ·材料和方法 | 第73-75页 |
| ·实验材料 | 第73页 |
| ·基因多态性检测及分型 | 第73页 |
| ·统计分析方法 | 第73-75页 |
| ·结果与分析 | 第75-77页 |
| ·基因分型与 Hardy–Weinberg 平衡检测 | 第75-76页 |
| ·遗传效应剖分结果 | 第76-77页 |
| ·遗传方差剖分结果 | 第77页 |
| ·讨论 | 第77-82页 |
| ·关于皮肤反射系数的测量 | 第77-78页 |
| ·关于 NOIA 模型的适用性 | 第78-79页 |
| ·MC1R 基因与ASIP 基因的上位作用关系 | 第79-80页 |
| ·毛色形成的遗传因素与环境因素 | 第80-82页 |
| 4 实验三 蒙古马不同毛色相关基因的组织差异表达分析 | 第82-105页 |
| ·实验材料 | 第82页 |
| ·实验动物及其组织 | 第82页 |
| ·主要仪器设备 | 第82页 |
| ·主要试剂 | 第82页 |
| ·实验方法 | 第82-85页 |
| ·各组织总 RNA 的提取 | 第82-83页 |
| ·QRT-PCR 反应 | 第83-85页 |
| ·标准品的制备及标准曲线的制作 | 第85页 |
| ·数据分析方法 | 第85页 |
| ·结果与分析 | 第85-95页 |
| ·蒙古马各组织总 RNA 的提取结果 | 第85-86页 |
| ·蒙古马β-actin 及毛色相关基因的QRT-PCR 扩增结果分析 | 第86-95页 |
| ·讨论 | 第95-105页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的特点 | 第95页 |
| ·内参基因的选择 | 第95-96页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的引物设计 | 第96页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的结果评估 | 第96-97页 |
| ·实时荧光定量 PCR 结果的数据分析方法 | 第97页 |
| ·实验样品选择及基因表达量分析说明 | 第97-98页 |
| ·毛色基因的表达量与毛色形成的关系 | 第98-105页 |
| 5 实验四 蒙古马 MC1R 与 ASIP 蛋白在不同毛色皮肤和垂体组织中的差异表达研究 | 第105-137页 |
| ·实验材料 | 第105-106页 |
| ·实验动物 | 第105页 |
| ·主要仪器和设备 | 第105页 |
| ·主要试剂 | 第105-106页 |
| ·实验步骤 | 第106-114页 |
| ·MC1R 多克隆抗体制备方法 | 第106-110页 |
| ·ASIP 多克隆抗体制备方法 | 第110-114页 |
| ·Western blotting 检测MC1R 蛋白在组织中的差异表达情况 | 第114页 |
| ·结果与分析 | 第114-129页 |
| ·MC1R 多克隆抗体制备结果 | 第114-122页 |
| ·ASIP 多克隆抗体制备结果 | 第122-128页 |
| ·Western blotting 检测MC1R 蛋白在组织中的差异表达情况 | 第128-129页 |
| ·讨论 | 第129-137页 |
| ·关于抗原表位预测 | 第129页 |
| ·关于抗原的制备 | 第129-130页 |
| ·关于外源基因蛋白质表达 | 第130-131页 |
| ·关于多克隆抗体制备 | 第131-132页 |
| ·ELISA 实验中的注意事项 | 第132页 |
| ·Western blotting 实验中的注意事项 | 第132-133页 |
| ·关于本实验抗体制备的可靠性 | 第133-134页 |
| ·MC1R 蛋白的差异表达与毛色表型的相关性 | 第134-137页 |
| 6 结论、创新点及进一步研究的问题 | 第137-140页 |
| ·结论 | 第137-138页 |
| ·创新点 | 第138页 |
| ·进一步研究的问题 | 第138-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
| 参考文献 | 第141-159页 |
| 作者简介 | 第159页 |
