| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 磷的生物功能 | 第11-12页 |
| 1.2 植物对磷的反应 | 第12页 |
| 1.3 土壤磷 | 第12-14页 |
| 1.4 植物耐低磷适应机制 | 第14-18页 |
| 1.4.1 根系形态结构上的变化 | 第14-15页 |
| 1.4.2 磷胁迫下植物生理生化上的变化 | 第15-16页 |
| 1.4.3 植物耐低磷的遗传机制 | 第16-18页 |
| 1.5 酸性磷酸酶研究 | 第18-23页 |
| 1.5.1 酸性磷酸酶活性研究 | 第18-19页 |
| 1.5.2 酸性磷酸酶基因研究 | 第19-20页 |
| 1.5.3 紫色酸性磷酸酶基因研究 | 第20-23页 |
| 2 目的与意义 | 第23-24页 |
| 3 材料与方法 | 第24-35页 |
| 3.1 材料及其处理 | 第24页 |
| 3.2 玉米中PAP基因的鉴定与分析 | 第24-25页 |
| 3.2.1 玉米中ZmPAP基因序列的预测 | 第24-25页 |
| 3.2.2 玉米ZmPAP基因的基因结构和系统发育分析 | 第25页 |
| 3.3 ZmPAPs半定量分析 | 第25-26页 |
| 3.3.1 模板的准备 | 第25页 |
| 3.3.2 各样品cDNA含量的均一化 | 第25-26页 |
| 3.3.3 基因半定量表达分析 | 第26页 |
| 3.4 ZmPAP基因克隆 | 第26-30页 |
| 3.4.1 总RNA提取 | 第26-27页 |
| 3.4.2 cDNA合成 | 第27页 |
| 3.4.3 反转录产物的电泳检测 | 第27页 |
| 3.4.4 开放阅读框的PCR扩增 | 第27-28页 |
| 3.4.5 目的片段的回收与纯化 | 第28-29页 |
| 3.4.6 目的片段与克隆载体的连接 | 第29页 |
| 3.4.7 CaCl_2法制备感受态细胞 | 第29页 |
| 3.4.8 热击法转化质粒DNA | 第29-30页 |
| 3.4.9 阳性克隆的鉴定 | 第30页 |
| 3.4.10 基因序列分析 | 第30页 |
| 3.5 玉米紫色酸性磷酸酶基因在低磷胁迫下的表达分析 | 第30-32页 |
| 3.5.1 引物设计 | 第30页 |
| 3.5.2 引物的特异性检测 | 第30-31页 |
| 3.5.3 标准品的制备及标准曲线的优化 | 第31页 |
| 3.5.4 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第31-32页 |
| 3.6 基因枪法转化洋葱表皮细胞 | 第32-34页 |
| 3.6.1 金粉制备 | 第32页 |
| 3.6.2 DNA微子弹制备 | 第32-33页 |
| 3.6.3 受体材料准备 | 第33页 |
| 3.6.4 基因枪法导入目的基因 | 第33-34页 |
| 3.6.5 观察 | 第34页 |
| 3.7 酸性磷酸酶活性测定 | 第34-35页 |
| 3.7.1 主要试剂 | 第34页 |
| 3.7.2 实验器材 | 第34页 |
| 3.7.3 操作步骤 | 第34-35页 |
| 3.7.4 计算 | 第35页 |
| 4 结果与分析 | 第35-60页 |
| 4.1 玉米PAPs家族的鉴定和基因结构分析 | 第35-38页 |
| 4.2 玉米ZmPAPs基因家族的系统进化关系 | 第38-39页 |
| 4.3 玉米PAP蛋白保守域分析 | 第39-41页 |
| 4.4 ZmPAP在低磷处理下的表达差异 | 第41-43页 |
| 4.4.1 引物设计 | 第41页 |
| 4.4.2 摸索GAPDH基因的PCR扩增平台期 | 第41-42页 |
| 4.4.3 摸索GAPDH基因的模板浓度 | 第42页 |
| 4.4.4 ZmPAPs在玉米自交系178和9782中的表达分析 | 第42-43页 |
| 4.5 ZmPAPs基因全长CDS克隆与序列分析 | 第43-51页 |
| 4.5.1 基因克隆 | 第43-44页 |
| 4.5.2 基因分析 | 第44-51页 |
| 4.6 ZmPAPs表达特性分析 | 第51-56页 |
| 4.6.1 引物的特异性及扩增效率检测 | 第51-52页 |
| 4.6.2 ZmPAPs在不同处理时问下的表达 | 第52-56页 |
| 4.7 亚细胞定位 | 第56-57页 |
| 4.7.1 载体构建 | 第56页 |
| 4.7.2 洋葱表皮细胞亚细胞定位分析 | 第56-57页 |
| 4.8 玉米苗期酸性磷酸酶活性测定 | 第57-60页 |
| 4.8.1 根系酸性磷酸酶活性测定 | 第57-58页 |
| 4.8.2 低磷胁迫下178酸性磷酸酶活性变化 | 第58-59页 |
| 4.8.3 低磷胁迫下9782酸性磷酸酶活性变化 | 第59-60页 |
| 5 讨论 | 第60-63页 |
| 5.1 玉米PAP基因家族 | 第60-61页 |
| 5.2 基因的表达分析 | 第61页 |
| 5.3 ZmPAP26a可能的生物学功能 | 第61-62页 |
| 5.4 酸性磷酸酶活性 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录 | 第70页 |
