| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-27页 |
| ·极性生长的研究进展 | 第10-19页 |
| ·具有顶端生长现象的细胞 | 第10-11页 |
| ·丝状真菌中的极性生长 | 第11-13页 |
| ·极性的建立:选择位点并进行标记 | 第12-13页 |
| ·极性的维持:芽管的萌发和延伸 | 第13页 |
| ·新生长轴线上的极性:分枝 | 第13页 |
| ·极性生长过程中的关键因素 | 第13-19页 |
| ·细胞骨架与极性生长 | 第14-15页 |
| ·顶体(Spitzenkorper)与极性生长 | 第15-16页 |
| ·定向分泌与极性生长 | 第16-17页 |
| ·膨压与极性生长 | 第17页 |
| ·信号传递与极性生长 | 第17-19页 |
| ·钙信号系统主要组分及功能 | 第19-24页 |
| ·钙离子 | 第20-21页 |
| ·钙离子通道蛋白MidA和CchA | 第21-22页 |
| ·钙离子结合蛋白CaM | 第22-23页 |
| ·CaM激酶CnaA | 第23-24页 |
| ·CnaA调控的转录因子CrzA | 第24页 |
| ·模式生物构巢曲霉ASPERGILLUS NIDULANS | 第24-25页 |
| ·本课题的研究内容、思路及方法 | 第25-27页 |
| ·研究内容 | 第26页 |
| ·研究思路 | 第26页 |
| ·研究方法 | 第26-27页 |
| 第2章 alcA(P)::CFP-midA同源整合菌株的筛选及鉴定 | 第27-36页 |
| ·材料与方法 | 第28-32页 |
| ·菌种及培养条件 | 第28-29页 |
| ·试剂与仪器 | 第29页 |
| ·A.nidulans基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·alcA(P)::CFP-midA同源整合菌株的构建 | 第30-31页 |
| ·重组子(发生Gene Replacement的转化子)的初步筛选 | 第31页 |
| ·重组子的进一步PCR鉴定 | 第31-32页 |
| ·实验结果 | 第32-34页 |
| ·重组子的初步表型鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组子的进一步PCR鉴定 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 第3章 构巢曲霉中MIDA在菌丝极性生长过程中的生物学功能 | 第36-64页 |
| ·MIDA对菌落及菌丝的影响 | 第36-43页 |
| ·材料与方法 | 第36-37页 |
| ·菌种及培养条件 | 第36页 |
| ·试剂与仪器 | 第36-37页 |
| ·MidA缺失对菌落生长速率和产孢的影响 | 第37页 |
| ·胞外Ca~(2+)浓度对MidA缺失菌株的影响 | 第37页 |
| ·菌丝液体培养及显微镜观察 | 第37页 |
| ·实验结果 | 第37-43页 |
| ·MidA缺失使菌落生长速率和产孢速率均变慢 | 第37-39页 |
| ·MidA缺失菌株对不同胞外Ca~(2+)浓度产生不同响应 | 第39-41页 |
| ·MidA是菌丝正常极性生长所必需的 | 第41-43页 |
| ·MIDA缺失对菌丝中ROS定位的影响 | 第43-45页 |
| ·材料与方法 | 第44-45页 |
| ·菌种及培养条件 | 第44页 |
| ·试剂与仪器 | 第44-45页 |
| ·实验结果 | 第45页 |
| ·MIDA对细胞超微结构——细胞壁和隔的影响 | 第45-49页 |
| ·材料与方法 | 第46-48页 |
| ·菌种及培养条件 | 第46-47页 |
| ·试剂与仪器 | 第47页 |
| ·透射电子显微镜(TEM)样品制备 | 第47-48页 |
| ·实验结果 | 第48-49页 |
| ·MIDA缺失对细胞壁成分的影响 | 第49-57页 |
| ·材料与方法 | 第52-55页 |
| ·菌种及培养条件 | 第52页 |
| ·试剂与仪器 | 第52-53页 |
| ·细胞壁成分1,3-β-D-glucan的测定 | 第53页 |
| ·细胞壁成分几丁质(chitin)的测定 | 第53-55页 |
| ·实验结果 | 第55-57页 |
| ·MidA缺失菌株细胞壁中1,3-β-D-glucan含量显著降低 | 第55-56页 |
| ·MidA缺失菌株细胞壁中chitin含量有所增加 | 第56-57页 |
| ·高渗环境对MIDA缺失菌株的影响 | 第57-60页 |
| ·材料与方法 | 第57-58页 |
| ·菌种及培养条件 | 第57页 |
| ·试剂与仪器 | 第57-58页 |
| ·菌丝固体培养及显微镜观察 | 第58页 |
| ·高渗环境下菌丝培养及观察 | 第58页 |
| ·实验结果 | 第58-60页 |
| ·MidA缺失菌株在固体培养基上菌丝极性生长正常 | 第58-59页 |
| ·MidA缺失菌株在液体高渗环境下恢复极性生长 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-64页 |
| ·MidA参与低钙条件下的Ca~(2+)转运 | 第60-61页 |
| ·MidA参与调控细胞壁整合途径 | 第61-64页 |
| 第4章 构巢曲霉MIDA敲除菌株CJA08的构建及鉴定 | 第64-80页 |
| ·材料与方法 | 第66-71页 |
| ·菌种、质粒及培养条件 | 第66页 |
| ·试剂与仪器 | 第66-67页 |
| ·引物设计 | 第67-68页 |
| ·融合PCR | 第68-69页 |
| ·扩增全长的各组成片段 | 第68-69页 |
| ·三片段连接Fusion PCR,产物纯化和质量评估 | 第69页 |
| ·构巢曲霉原生质体的制备及转化 | 第69-70页 |
| ·重组子的初步筛选 | 第70页 |
| ·转化子的进一步PCR诊断 | 第70-71页 |
| ·实验结果 | 第71-78页 |
| ·左侧翼序列和右侧翼序列的扩增 | 第71页 |
| ·Cassette上AfpyrG片段PCR扩增结果 | 第71-72页 |
| ·Fusion PCR全长片段的扩增 | 第72-73页 |
| ·转化子的初步表型鉴定 | 第73-74页 |
| ·转化子的诊断PCR结果 | 第74-75页 |
| ·midA敲除菌株△midA菌落表型 | 第75-76页 |
| ·敲除菌株△midA对胞外低Ca~(2+)浓度的响应 | 第76-77页 |
| ·midA敲除对菌丝极性生长的影响较小 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| 第5章 结论 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-90页 |
| 附录A | 第90-92页 |
| 附录B | 第92-93页 |
| 在读期间发表的学术论文与研究成果 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
