| 本研究工作的主要创新点 | 第5-6页 |
| 目录 | 第6-10页 |
| 摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 第1章 前言 | 第16-43页 |
| 1.1 铁载体是微生物获取铁的重要方式 | 第16-18页 |
| 1.2 铁载体生物合成及转运 | 第18-23页 |
| 1.2.1 铁载体生物合成 | 第18-21页 |
| 1.2.2 Fe~(3+)-铁载体复合物的转运 | 第21-23页 |
| 1.3 假单胞菌铁载体 | 第23-31页 |
| 1.3.1 假单胞菌铁载体种类多样性 | 第23-28页 |
| 1.3.2 假单胞菌铁载体利用的等级制度 | 第28-30页 |
| 1.3.3 假单胞菌TonB依赖的受体的多样性及异种铁载体的摄取 | 第30-31页 |
| 1.4 铁载体合成及转运的调控 | 第31-34页 |
| 1.5 GacS/GacA双组份调控系统 | 第34-41页 |
| 1.5.1 双组份调控系统 | 第34-35页 |
| 1.5.2 GacS/GacA双组份系统调控模型 | 第35-37页 |
| 1.5.3 GacS/GacA系统的生物学效应 | 第37-41页 |
| 1.5.4 GacS/GacA系统与铁载体的相关性 | 第41页 |
| 1.6 本研究的目的、内容和意义 | 第41-43页 |
| 第2章 Pseudomonas sp.HYS高产铁载体合成突变株的筛选及基因鉴定 | 第43-71页 |
| 2.1 实验材料 | 第43-47页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和引物 | 第43-45页 |
| 2.1.2 仪器和试剂 | 第45页 |
| 2.1.3 培养基和溶液配制 | 第45-47页 |
| 2.2 实验方法 | 第47-55页 |
| 2.2.1 质粒提取 | 第47页 |
| 2.2.2 一步法提质粒 | 第47页 |
| 2.2.3 假单胞菌基因组提取 | 第47-48页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态制备及转化 | 第48-49页 |
| 2.2.5 铁载体的检测 | 第49页 |
| 2.2.6 生长曲线与铁载体分泌曲线的测定 | 第49页 |
| 2.2.7 HYS转座子插入突变株的构建 | 第49-50页 |
| 2.2.8 HYS铁载体合成突变株的筛选及鉴定 | 第50页 |
| 2.2.9 TAIL-PCR | 第50-53页 |
| 2.2.10 半随机引物PCR | 第53-55页 |
| 2.2.11 转座子挽救 | 第55页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第55-67页 |
| 2.3.1 HYS与其他假单胞菌产铁载体对比 | 第55-57页 |
| 2.3.2 HYS转座子突变库的构建及铁载体合成突变株的筛选鉴定 | 第57-62页 |
| 2.3.3 HYS铁载体合成突变株转座子插入基因定位与分析 | 第62-67页 |
| 2.4 讨论 | 第67-70页 |
| 2.4.1 转座子诱变法筛选相关基因的使用心得 | 第67-68页 |
| 2.4.2 铁载体合成突变株及相关基因的分析 | 第68-70页 |
| 2.5 小结 | 第70-71页 |
| 第3章 GacS/GacA双组分系统对HYS铁载体合成调控的研究 | 第71-99页 |
| 3.1 实验材料 | 第71-75页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和引物 | 第71-74页 |
| 3.1.2 仪器和试剂 | 第74页 |
| 3.1.3 培养基及溶液配制 | 第74-75页 |
| 3.2 实验方法 | 第75-78页 |
| 3.2.1 铁载体检测方法 | 第75-76页 |
| 3.2.2 铁载体紫外可见吸收光谱测定 | 第76页 |
| 3.2.3 细菌接合实验 | 第76-77页 |
| 3.2.4 基因敲除菌株构建 | 第77-78页 |
| 3.2.5 回补及过表达菌株的构建 | 第78页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第78-95页 |
| 3.3.1 HYS产生非荧光和荧光两类铁载体 | 第78-82页 |
| 3.3.2 GacS/GacA对HYS铁载体的调控作用 | 第82-86页 |
| 3.3.3 非荧光、荧光铁载体特性比较 | 第86-92页 |
| 3.3.4 Gac/Rsm通路对HYS铁载体的调控 | 第92-95页 |
| 3.4 讨论 | 第95-97页 |
| 3.4.1 HYS两类不同性质铁载体共存的意义 | 第95-96页 |
| 3.4.2 GacS/GacA双组份系统对HYS两类铁载体的调控作用 | 第96-97页 |
| 3.5 小结 | 第97-99页 |
| 第4章 HYS高产铁载体相关基因簇(nfs基因簇)的功能研究 | 第99-123页 |
| 4.1 实验材料 | 第99-104页 |
| 4.1.1 菌株、质粒和引物 | 第99-104页 |
| 4.1.2 仪器和试剂 | 第104页 |
| 4.1.3 培养基及溶液配制 | 第104页 |
| 4.2 实验方法 | 第104-108页 |
| 4.2.1 △pvdA转座子插入突变株的构建、筛选及鉴定 | 第104-105页 |
| 4.2.2 △pvdA铁载体合成突变株转座子插入位点的定位 | 第105页 |
| 4.2.3 铁载体检测方法 | 第105页 |
| 4.2.4 总RNA提取及反转录PCR(RT-PCR) | 第105-106页 |
| 4.2.5 包含lacZ翻译融合载体菌株的构建 | 第106-107页 |
| 4.2.6 β-半乳糖苷酶活性测定 | 第107-108页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第108-121页 |
| 4.3.1 △pvdA转座子插入突变株的构建、筛选及插入基因定位 | 第108-110页 |
| 4.3.2 nfs基因簇与HYS非荧光铁载体的相关性 | 第110-116页 |
| 4.3.3 nfs基因簇的表达与外界铁浓度的关系 | 第116-119页 |
| 4.3.4 nfs基因簇的表达与GacS/GacA的关系 | 第119-121页 |
| 4.4 讨论 | 第121-122页 |
| 4.5 小结 | 第122-123页 |
| 研究总结与展望 | 第123-126页 |
| 一 研究总结 | 第123-124页 |
| 二 展望 | 第124-126页 |
| 参考文献 | 第126-143页 |
| 博士研究生期间科研成果 | 第143-144页 |
| 致谢 | 第144-145页 |
