| 学位论文数据集 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 符号说明 | 第18-19页 |
| 第一章 绪论 | 第19-31页 |
| 1.1 巴斯德毕赤酵母表达体系 | 第19-24页 |
| 1.1.1 毕赤酵母表达体系简介 | 第19-20页 |
| 1.1.2 毕赤酵母表达体系常用菌株与载体 | 第20-22页 |
| 1.1.3 毕赤酵母表达体系常用启动子 | 第22页 |
| 1.1.4 毕赤酵母表达体系的优劣势 | 第22-23页 |
| 1.1.5 毕赤酵母表达体系的应用 | 第23-24页 |
| 1.2 木糖醇及木糖还原酶 | 第24-26页 |
| 1.2.1 木糖醇简介及其功能 | 第24页 |
| 1.2.2 木糖代谢途径 | 第24-25页 |
| 1.2.3 木糖还原酶 | 第25-26页 |
| 1.3 凝乳酶简介 | 第26-29页 |
| 1.3.1 奶酪与凝乳酶 | 第26页 |
| 1.3.2 凝乳机理 | 第26-27页 |
| 1.3.3 凝乳酶来源 | 第27-28页 |
| 1.3.4 凝乳酶生产方法 | 第28页 |
| 1.3.5 国内外研究进展 | 第28-29页 |
| 1.4 本课题研究内容与意义 | 第29-31页 |
| 第二章 木糖还原酶重组酵母工程菌的构建及酶学性质的测定 | 第31-49页 |
| 2.1 木糖还原酶重组毕赤酵母基因工程菌的构建 | 第31-42页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第32-36页 |
| 2.1.3 实验结果与讨论 | 第36-42页 |
| 2.2 木糖还原酶酶学性质的测定 | 第42-49页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第42页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 2.2.3 实验结果与讨论 | 第45-48页 |
| 2.2.4 小结 | 第48-49页 |
| 第三章 重组酵母工程菌诱导表达生产木糖醇及诱导条件的优化 | 第49-71页 |
| 3.1 产木糖醇重组酵母工程菌的构建 | 第49-55页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第49-50页 |
| 3.1.2 实验方法 | 第50-51页 |
| 3.1.3 实验结果与讨论 | 第51-55页 |
| 3.2 重组工程菌诱导表达与生产木糖醇 | 第55-59页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第55页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第55-56页 |
| 3.2.3 实验结果与讨论 | 第56-59页 |
| 3.3 重组工程菌诱导表达生产木糖醇诱导条件的优化 | 第59-71页 |
| 3.3.1 pPIC3.5k-XYL1/GS115基因工程菌高产菌株的筛选 | 第59页 |
| 3.3.2 pPIC3.5k-XYL1/GS115基因工程菌高产菌株溶氧条件的优化 | 第59-63页 |
| 3.3.3 pPIC3.5k-XYL1/GS115基因工程菌碳源添加条件的优化 | 第63-64页 |
| 3.3.4 pPIC3.5k-XYL1/GS115基因工程菌高产菌株木糖添加量的优化 | 第64-66页 |
| 3.3.5 pPIC3.5k-XYL1/GS115基因工程菌高产菌株木糖添加时间的优化 | 第66-68页 |
| 3.3.6 小结 | 第68-71页 |
| 第四章 不同来源凝乳酶基因在毕赤酵母中的表达研究 | 第71-93页 |
| 4.1 凝乳酶基因工程菌的构建 | 第71-84页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第71-72页 |
| 4.1.2 实验方法 | 第72-76页 |
| 4.1.3 实验结果与讨论 | 第76-84页 |
| 4.2 不同来源凝乳酶酶活的测定 | 第84-87页 |
| 4.2.1. 诱导条件 | 第84页 |
| 4.2.2 工程菌生物量测定 | 第84-85页 |
| 4.2.3 工程菌诱导分泌表达总蛋白量测定 | 第85-86页 |
| 4.2.4 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第86页 |
| 4.2.5 凝乳酶酶活测定 | 第86-87页 |
| 4.3 影响凝乳酶活因素的优化 | 第87-93页 |
| 4.3.1 诱导时间 | 第87页 |
| 4.3.2 反应温度 | 第87-88页 |
| 4.3.3 反应PH | 第88-89页 |
| 4.3.4 Ca~(2+)浓度 | 第89页 |
| 4.3.5 凝乳酶的热稳定性测定 | 第89-90页 |
| 4.3.6 蛋白酶水解活性测定 | 第90-91页 |
| 4.3.7 小结 | 第91-93页 |
| 第五章 毕赤酵母启动子的更换与含GAP启动子产凝乳酶重组酵母工程菌的构建 | 第93-107页 |
| 5.1 组成型启动子pGAP的获得与含GAP启动子重组载体pGAPZaA的构建 | 第93-98页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第93页 |
| 5.1.2 实验方法 | 第93-95页 |
| 5.1.3 实验结果与讨论 | 第95-98页 |
| 5.2 三种来源凝乳酶重组质粒pGAPZaA-CHY的构建 | 第98-100页 |
| 5.2.1 实验方法 | 第98页 |
| 5.2.2 实验结果与讨论 | 第98-100页 |
| 5.3 含GAP启动子的重组工程菌pGAPZaA-CHY/GS115的构建 | 第100-101页 |
| 5.4 重组工程菌凝乳酶活的测定 | 第101-107页 |
| 5.4.1 重组pGAPZaA-CHY/GS115酵母工程菌的发酵培养 | 第101-102页 |
| 5.4.2 酵母工程菌生物量的测定 | 第102页 |
| 5.4.3 酵母工程菌总蛋白含量的测定 | 第102-103页 |
| 5.4.4 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第103-104页 |
| 5.4.5 酵母工程菌凝乳酶活的测定 | 第104-105页 |
| 5.4.6 小结 | 第105-107页 |
| 第六章 结论与展望 | 第107-111页 |
| 6.1 实验结论 | 第107-109页 |
| 6.1.1 毕赤酵母对木糖还原酶的表达 | 第107-108页 |
| 6.1.2 毕赤酵母对凝乳酶的表达 | 第108-109页 |
| 6.2 展望 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-115页 |
| 致谢 | 第115-117页 |
| 完成与发表的学术论文 | 第117-119页 |
| 导师与作者简介 | 第119-121页 |
| 附件 | 第121-122页 |
