| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩写词表 | 第8-11页 |
| 1 引言 | 第11-15页 |
| 1.1 玉米大斑病菌概况 | 第11页 |
| 1.2 cAMP 信号途径与病原物的致病机制 | 第11-12页 |
| 1.3 PKA 基因的功能研究 | 第12-13页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第13-15页 |
| 2 材料和方法 | 第15-26页 |
| 2.1 供试菌株、寄主和质粒 | 第15页 |
| 2.2 供试培养基 | 第15页 |
| 2.3 供试试剂 | 第15页 |
| 2.4 主要仪器 | 第15-16页 |
| 2.5 玉米大斑病菌 StpkaC2 基因的生物信息学分析 | 第16页 |
| 2.6 玉米大斑病菌 StpkaC1 和 StpkaC2 基因表达规律分析 | 第16-18页 |
| 2.6.1 引物的设计 | 第16页 |
| 2.6.2 Trizol 法提取总 RNA | 第16-17页 |
| 2.6.3 反转录 | 第17页 |
| 2.6.4 荧光定量 PCR 检测 | 第17-18页 |
| 2.7 玉米大班病菌 StpkaC1 和 StpkaC2 基因敲除载体的构建 | 第18-21页 |
| 2.7.1 引物的设计 | 第18页 |
| 2.7.2 PCR 的扩增 | 第18-19页 |
| 2.7.3 PCR 扩增产物的凝胶回收 | 第19页 |
| 2.7.4 PCR 扩增产物的克隆测序 | 第19-20页 |
| 2.7.5 目的片段与目标载体的连接 | 第20-21页 |
| 2.8 玉米大斑病菌 StpkaC1 和 StpkaC2 基因敲除突变体的创制 | 第21-23页 |
| 2.8.1 StpkaC1 和 StpkaC2 基因敲除载体转化玉米大斑病菌原生质体 | 第21-22页 |
| 2.8.2 玉米大斑病菌 StpkaC1 和 StpkaC2 基因敲除突变体的获得 | 第22-23页 |
| 2.9 玉米大斑病菌 StpkaC1 和 StpkaC2 基因敲除突变菌株的分析 | 第23-26页 |
| 2.9.1 突变菌株菌落形态的观察 | 第23-24页 |
| 2.9.2 突变菌株生长速度的测定 | 第24页 |
| 2.9.3 突变菌株孢子产量的测定 | 第24页 |
| 2.9.4 突变菌株孢子的萌发、附着胞形成及侵染情况 | 第24页 |
| 2.9.5 突变菌株的穿透能力观察 | 第24页 |
| 2.9.6 突变菌株胞内黑色素含量分析 | 第24-25页 |
| 2.9.7 突变菌株 HT-毒素活性分析 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-39页 |
| 3.1 StpkaC2 基因的生物信息学分析 | 第26-28页 |
| 3.1.1 StpkaC1 和 StpkaC2 基因的基因同源性分析及分子进化树的构建 | 第26页 |
| 3.1.2 StpkaC2 蛋白保守结构域分析 | 第26-27页 |
| 3.1.3 StpkaC2 的蛋白质结构预测 | 第27-28页 |
| 3.2 StpkaC1 和 StpkaC2 基因在分生孢子侵染生长不同阶段的表达规律 | 第28-29页 |
| 3.3 StpkaC1 和 StpkaC2 基因敲除载体的构建 | 第29-31页 |
| 3.3.1 StpkaC1 基因片段的克隆 | 第29-30页 |
| 3.3.2 StpkaC1 基因敲除载体的酶切验证 | 第30页 |
| 3.3.3 StpkaC2 基因敲除载体的构建 | 第30-31页 |
| 3.4 StpkaC1 和 StpkaC2 基因敲除突变体的获得 | 第31-33页 |
| 3.4.1 StpkaC1 和 StpkaC2 基因敲除突变菌株的 PCR 验证 | 第31-32页 |
| 3.4.2 StpkaC1 和 StpkaC2 基因敲除突变菌株的 Southern blot 鉴定 | 第32-33页 |
| 3.5 StpkaC1 和 StpkaC2 基因敲除突变菌株的表型分析 | 第33-39页 |
| 3.5.1 突变菌株的菌落形态观察 | 第33页 |
| 3.5.2 突变菌株生长速率的测定 | 第33-34页 |
| 3.5.3 突变菌株产孢量的测定 | 第34页 |
| 3.5.4 突变菌株分生孢子萌发、附着胞形成及穿透情况 | 第34-36页 |
| 3.5.5 突变菌株胞内黑色素分析 | 第36页 |
| 3.5.6 突变菌株 HT-毒素 HPLC 分析 | 第36-37页 |
| 3.5.7 突变菌株的致病力分析 | 第37-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| 5 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第46-47页 |
| 作者简历 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
