| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第10-24页 |
| 1.1 微生物冶金现状及发展 | 第10-13页 |
| 1.1.1 微生物冶金简介 | 第10-11页 |
| 1.1.2 微生物冶金应用现状 | 第11-12页 |
| 1.1.3 几种常见的浸矿微生物 | 第12-13页 |
| 1.2 细菌抗氟研究进展 | 第13-17页 |
| 1.2.1 氟离子细菌毒害的作用 | 第13-14页 |
| 1.2.2 氟离子杀菌或抑菌的机制 | 第14页 |
| 1.2.3 细菌抗氟机制 | 第14-17页 |
| 1.2.4 细菌抗氟研究现状 | 第17页 |
| 1.3 生物信息学分析 | 第17-18页 |
| 1.3.1cDNA序列的分析 | 第17-18页 |
| 1.3.2 蛋白质预测 | 第18页 |
| 1.4 Real-time Quantitative PCR方法简介 | 第18-20页 |
| 1.4.1 Real-time Quantitative PCR原理介绍 | 第18-20页 |
| 1.4.2 Real-time Quantitative PCR反应条件优化方法 | 第20页 |
| 1.5 嗜酸性氧化亚铁硫杆菌研究现状 | 第20-21页 |
| 1.5.1 嗜酸性氧化亚铁硫杆菌的应用 | 第21页 |
| 1.5.2 A.ferrooxidans亚铁氧化系统 | 第21页 |
| 1.5.3 A.ferrooxidans硫氧化系统 | 第21页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第21-23页 |
| 1.7 实验流程图 | 第23-24页 |
| 第二章 两株A.ferrooxidans对氟离子耐受能力的鉴别 | 第24-26页 |
| 2.1 引言 | 第24页 |
| 2.2 实验材料及方法 | 第24-25页 |
| 2.2.1 实验菌株与培养基 | 第24页 |
| 2.2.2 EDTA滴定法测定培养液中的Fe~(2+)的含量方法 | 第24-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25页 |
| 2.4 实验结果及结论 | 第25-26页 |
| 第三章 氟抗性相关基因crcB的测序、克隆和生物信息学分析 | 第26-48页 |
| 3.1 引言 | 第26页 |
| 3.2 实验材料 | 第26-27页 |
| 3.2.1 菌种与质粒 | 第26页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第26页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第26页 |
| 3.2.4 培养基 | 第26-27页 |
| 3.3 实验方法 | 第27-31页 |
| 3.3.1 A.ferrooxidans菌基因组提取 | 第27页 |
| 3.3.2 crcB基因测序 | 第27-30页 |
| 3.3.3 crcB基因的克隆 | 第30页 |
| 3.3.4 crcB基因生物信息学分析 | 第30-31页 |
| 3.4 结果分析 | 第31-46页 |
| 3.4.1 crcB基因的克隆 | 第31页 |
| 3.4.2 crcB基因测序结果对比分析 | 第31-35页 |
| 3.4.3 crcB基因生物信息学分析 | 第35-46页 |
| 3.5 讨论 | 第46-48页 |
| 第四章 不同氟条件下A.ferrooxidans KF的crcB基因差异表达 | 第48-60页 |
| 4.1 引言 | 第48页 |
| 4.2 实验材料 | 第48页 |
| 4.2.1 实验菌株及试剂 | 第48页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第48页 |
| 4.2.3 培养基及缓冲液 | 第48页 |
| 4.3 实验方法 | 第48-53页 |
| 4.3.1 原菌株总RNA提取 | 第48-49页 |
| 4.3.2 总RNA反转录成cDNA | 第49页 |
| 4.3.3 两个样本crcB基因表达量差异测定 | 第49-53页 |
| 4.3.4 Real-time Quantitative PCR数据处理 | 第53页 |
| 4.4 结果分析 | 第53-59页 |
| 4.4.1 RNA验证 | 第53-54页 |
| 4.4.2 确定反应退火温度 | 第54-55页 |
| 4.4.3 目的基因及内参基因的标准曲线和熔解曲线 | 第55-59页 |
| 4.4.4 氟离子刺激下A.ferrooxidans KF的crcB基因的差异性表达 | 第59页 |
| 4.5 讨论 | 第59-60页 |
| 第五章 crcB基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第60-66页 |
| 5.1 引言 | 第60页 |
| 5.2 实验菌种、试剂及仪器 | 第60页 |
| 5.2.1 实验菌种 | 第60页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第60页 |
| 5.2.3 实验仪器 | 第60页 |
| 5.2.4 培养基及缓冲液 | 第60页 |
| 5.3 实验方法 | 第60-63页 |
| 5.3.1 构建重组表达质粒载体pET30a-crcB及导入表达宿主E.coli BL21DE3 | 第60-63页 |
| 5.3.2 重组菌抗氟能力检测 | 第63页 |
| 5.4 结果分析 | 第63-65页 |
| 5.4.1 构建重组表达载体pET30a-crcB | 第63-65页 |
| 5.4.2 重组菌（BL21DE3）抗氟能力检测 | 第65页 |
| 5.5 讨论 | 第65-66页 |
| 结论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第75页 |
