| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-40页 |
| 引言 | 第16-17页 |
| 1 细菌生物被膜 | 第17-29页 |
| ·细菌生物被膜概念及组成 | 第17-18页 |
| ·细菌生物被膜形成过程、影响因素及调控机制 | 第18-22页 |
| ·细菌形成生物被膜的意义 | 第22-25页 |
| ·细菌生物被膜和人类感染性疾病 | 第25-29页 |
| 2 细菌胞外多糖 | 第29-34页 |
| ·细菌胞外多糖及其分类 | 第29-30页 |
| ·细菌胞外多糖的制备 | 第30-31页 |
| ·细菌胞外多糖的生物活性及应用 | 第31-34页 |
| 3 细菌胞外多糖在生物被膜形成中的作用 | 第34-38页 |
| ·参与生物被膜形成的细菌胞外多糖 | 第34-35页 |
| ·具有抗生物被膜活性的细菌胞外多糖 | 第35-38页 |
| 4 本论文的研究目的和技术路线 | 第38-40页 |
| ·研究目的 | 第38页 |
| ·技术路线 | 第38-40页 |
| 第二章 海洋弧菌QY101 胞外多糖A101 的分离纯化及性质研究 | 第40-82页 |
| 引言 | 第40页 |
| 第一节 海洋弧菌QY101 胞外多糖A101 的分离纯化和化学性质研究 | 第40-62页 |
| 1 实验材料 | 第40-43页 |
| ·菌株 | 第40-41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·培养基和溶液 | 第41-42页 |
| ·主要实验仪器 | 第42-43页 |
| 2 实验方法 | 第43-50页 |
| ·细菌生物被膜形成能力检测 | 第43-44页 |
| ·胞外多糖A101 的分离纯化[151, 152] | 第44-46页 |
| ·海洋弧菌QY101 的发酵 | 第44页 |
| ·弧菌QY101 胞外粗多糖的制备 | 第44页 |
| ·蛋白酶法和Sevage 法合用脱蛋白 | 第44-45页 |
| ·离子交换色谱分离[153] | 第45-46页 |
| ·凝胶过滤色谱分离 | 第46页 |
| ·总糖含量的测定[154] | 第46-47页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第47页 |
| ·糖醛酸含量的测定[154] | 第47-48页 |
| ·A101 单糖组成分析 | 第48-49页 |
| ·A101 分子量测定 | 第49-50页 |
| ·A101 红外吸收光谱分析 | 第50页 |
| 3 实验结果 | 第50-60页 |
| ·粗多糖抽提路线 | 第50页 |
| ·乙醇分级沉淀 | 第50-51页 |
| ·粗多糖理化性质分析 | 第51-54页 |
| ·多糖含量的测定 | 第52-53页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第53-54页 |
| ·糖醛酸含量的测定 | 第54页 |
| ·脱蛋白处理 | 第54-55页 |
| ·离子交换色谱分离 | 第55-56页 |
| ·凝胶排阻色谱纯化 | 第56-57页 |
| ·A101 分子量的分析 | 第57页 |
| ·A101 单糖组成的分析 | 第57-59页 |
| ·A101 的红外吸收分析 | 第59-60页 |
| 4 小结 | 第60-61页 |
| 5 讨论 | 第61-62页 |
| ·细菌胞外多糖分离纯化 | 第61-62页 |
| ·细菌胞外多糖的未来展望 | 第62页 |
| 第二节 A101 多糖生物学性质的初步分析 | 第62-82页 |
| 1 实验材料 | 第62-64页 |
| ·菌株和质粒 | 第62-63页 |
| ·培养基和溶液 | 第63页 |
| ·主要试剂 | 第63页 |
| ·主要实验仪器 | 第63-64页 |
| 2 实验方法 | 第64-70页 |
| ·简并PCR[155] | 第64-68页 |
| ·基因组DNA 模板的制备（CTAB/NaCl 法） | 第64页 |
| ·PCR | 第64-65页 |
| ·PCR 产物胶回收 | 第65页 |
| ·DH5αpMD18-T- wzaQY101-1 菌株构建 | 第65-68页 |
| ·阳性克隆进行序列测定 | 第68页 |
| ·反向PCR[156] | 第68-70页 |
| ·反向PCR 的引物 | 第68页 |
| ·反向PCR 模板的制备 | 第68-69页 |
| ·PCR | 第69-70页 |
| ·全序列的获得 | 第70页 |
| ·生物信息学分析[157] | 第70页 |
| 3 实验结果 | 第70-78页 |
| ·A101 与已知弧菌胞外多糖的比较分析 | 第70-71页 |
| ·QY101 中荚膜多糖转运蛋白基因的克隆 | 第71-76页 |
| ·简并PCR | 第71-74页 |
| ·反向PCR | 第74-76页 |
| ·生物信息学分析 | 第76-78页 |
| ·蛋白序列分析 | 第76页 |
| ·蛋白信号肽预测 | 第76-77页 |
| ·蛋白跨膜疏水区预测 | 第77页 |
| ·蛋白二级结构预测 | 第77-78页 |
| 4 小结 | 第78-79页 |
| 5 讨论 | 第79-82页 |
| ·基因克隆 | 第79-80页 |
| ·生物信息学在蛋白质研究中的应用 | 第80-82页 |
| 第三章 多糖A101 抗细菌生物被膜活性的研究 | 第82-103页 |
| 引言 | 第82页 |
| 1 实验材料 | 第82-85页 |
| ·菌株、质粒和软件 | 第82-83页 |
| ·主要试剂 | 第83-84页 |
| ·培养基和溶液 | 第84-85页 |
| ·主要实验仪器 | 第85页 |
| 2 实验方法 | 第85-90页 |
| ·金黄色葡萄球菌微管生物膜模型的构建 | 第85-86页 |
| ·96 孔板生物膜模型的构建 | 第86页 |
| ·金黄色葡萄球菌RN6390-GFP 的构建 | 第86-89页 |
| ·E. coli DH5α感受态细胞的制备[155] | 第86-87页 |
| ·热激法转化质粒入大肠杆菌[155] | 第87页 |
| ·阳性转化子的鉴定 | 第87-88页 |
| ·转化菌株的保存 | 第88页 |
| ·金黄色葡萄球菌感受态的制备[172] | 第88页 |
| ·金黄色葡萄球菌RN4220 的电击转化 | 第88-89页 |
| ·从金黄色葡萄球菌RN4220 中提取质粒转化RN6390 | 第89页 |
| ·Flow cell 生物被膜模型 | 第89页 |
| ·Flow cell 实验 | 第89-90页 |
| 3 实验结果 | 第90-100页 |
| ·金黄色葡萄球菌生物被膜模型的建立 | 第90-95页 |
| ·金黄色葡萄球菌生物被膜微管模型的建立 | 第90-91页 |
| ·金黄色葡萄球菌生物被膜96 微孔板模型的建立[167] | 第91-92页 |
| ·金黄色葡萄球菌生物被膜动态模型的构建[173] | 第92-95页 |
| ·A101 对P. aeruginosa FRD1 和S. aureus RN6390 生物被膜形成抑制作用的分析 | 第95-96页 |
| ·A101 抗细菌生物被膜活性的广谱性检测 | 第96-97页 |
| ·A101 在Flow cell 中对生物被膜形成的抑制作用 | 第97-99页 |
| ·A101 对生物被膜的破坏作用 | 第99-100页 |
| 4 小结 | 第100-101页 |
| 5 讨论 | 第101-103页 |
| ·生物被膜模型构建的意义及选择 | 第101页 |
| ·A101 的潜在价值 | 第101-103页 |
| 第四章 A101 抗细菌生物被膜作用机制的探讨 | 第103-112页 |
| 引言 | 第103页 |
| 1 实验材料 | 第103-104页 |
| ·菌株 | 第103页 |
| ·主要试剂 | 第103页 |
| ·主要实验仪器 | 第103-104页 |
| 2 实验方法 | 第104-105页 |
| ·A101 的强酸水解 | 第104页 |
| ·浮游细菌生长曲线的测定 | 第104页 |
| ·菌体对表面粘附能力的检测[191] | 第104页 |
| ·菌体聚集能力检测 | 第104-105页 |
| ·对菌体团簇破坏能力的检测 | 第105页 |
| 3 实验结果 | 第105-109页 |
| ·A101 的降解产物对细菌生物被膜的影响 | 第105-106页 |
| ·A101 对浮游细菌生长曲线的影响 | 第106-107页 |
| ·A101 对细菌生物被膜形成初期粘附的影响 | 第107页 |
| ·A101 对细菌聚集体形成的影响 | 第107-108页 |
| ·A101 对已形成细菌聚集体的破坏作用 | 第108-109页 |
| 4 小结 | 第109-110页 |
| 5 讨论 | 第110-112页 |
| ·A101 结构与功能 | 第110页 |
| ·A101 抗生物被膜作用机制的进一步推测 | 第110-112页 |
| 结语与创新 | 第112-114页 |
| 1 总结 | 第112页 |
| 2 创新点 | 第112-113页 |
| 3 展望 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-130页 |
| 附录 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 在读期间的学术成果 | 第132页 |
