| 摘要 | 第10-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-29页 |
| 1.1 奶牛乳腺发育与泌乳 | 第15页 |
| 1.2 奶牛泌乳功能基因组学研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3 其他功能基因的研究进展 | 第16页 |
| 1.4 奶牛乳蛋白合成相关信号通路 | 第16-19页 |
| 1.4.1 JAK-Stat5信号通路 | 第17-18页 |
| 1.4.2 m TOR信号通路 | 第18-19页 |
| 1.5 氨基酸对泌乳的调节作用 | 第19页 |
| 1.6 14-3-3 蛋白的研究进展 | 第19-27页 |
| 1.6.1 14-3-3 蛋白简介 | 第19-20页 |
| 1.6.2 14-3-3 蛋白的结构 | 第20-22页 |
| 1.6.3 14-3-3 蛋白调控细胞周期 | 第22-24页 |
| 1.6.4 14-3-3 蛋白调节细胞信号转导 | 第24-27页 |
| 1.6.5 14-3-3γ 蛋白的生物学功能 | 第27页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第27-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.1.1 主要实验试剂 | 第29页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.1.3 实验动物与细胞 | 第30页 |
| 2.2 乳腺上皮细胞的培养纯化与鉴定 | 第30-32页 |
| 2.2.1 乳腺上皮细胞的培养纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.2 乳腺上皮细胞的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3 添加Met对 14-3-3γ 表达和细胞增殖的影响 | 第32页 |
| 2.3.1 添加Met对 14-3-3γ 表达的影响 | 第32页 |
| 2.3.2 添加Met对细胞增殖的影响 | 第32页 |
| 2.4 14-3-3γ 对泌乳信号通路及细胞增殖的影响 | 第32-36页 |
| 2.4.1 14-3-3γ 过表达对泌乳相关蛋白的影响 | 第32-35页 |
| 2.4.2 14-3-3γ 过表达对细胞增殖的影响 | 第35页 |
| 2.4.3 14-3-3γ 抑制对泌乳相关蛋白的影响 | 第35-36页 |
| 2.4.4 14-3-3γ 抑制对细胞增殖的影响 | 第36页 |
| 2.5 14-3-3γ 的互作蛋白分析 | 第36-39页 |
| 2.5.1 免疫共沉淀分析 14-3-3γ 的互作蛋白 | 第36-37页 |
| 2.5.2 14-3-3γ 与eIF1AX、RPS7和eIF5互作的WB验证 | 第37页 |
| 2.5.3 14-3-3γ 与eIF1AX、RPS7和eIF5的共定位分析 | 第37页 |
| 2.5.4 FRET分析 14-3-3γ 的相互作用蛋白 | 第37-38页 |
| 2.5.5 WB检测Met对互作蛋白表达的影响 | 第38页 |
| 2.5.6 IF检测Met对互作蛋白表达的影响 | 第38页 |
| 2.5.7 WB检测 14-3-3γ 过表达对相关蛋白表达的影响 | 第38页 |
| 2.5.8 IF检测 14-3-3γ 过表达对互作蛋白表达的影响 | 第38页 |
| 2.5.9 WB检测 14-3-3γ 抑制对相关蛋白表达的影响 | 第38页 |
| 2.5.10 IF检测 14-3-3γ 抑制对互作蛋白表达的影响 | 第38-39页 |
| 2.5.11互作蛋白过表达对翻译和细胞增殖的影响 | 第39页 |
| 2.6 数据分析 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-83页 |
| 3.1 乳腺上皮细胞的培养纯化与鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2 添加Met对 14-3-3γ 表达和细胞增殖的影响 | 第41-45页 |
| 3.2.1 WB检测Met对 14-3-3γ 和 β-酪蛋白表达的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.2 IF检测添加Met对 14-3-3γ 表达的影响 | 第42-43页 |
| 3.2.3 添加Met对细胞增殖的影响 | 第43-45页 |
| 3.3 14-3-3γ 过表达对泌乳信号通路及细胞增殖的影响 | 第45-53页 |
| 3.3.1 p GCMV-IRES-EGFP143-3γ 过表达载体的构建及细胞转染 | 第45-47页 |
| 3.3.2 14-3-3γ 过表达对相关蛋白的影响 | 第47-50页 |
| 3.3.3 14-3-3γ 过表达对细胞增殖的影响 | 第50-53页 |
| 3.4 14-3-3γ 抑制对泌乳信号通路及细胞增殖的影响 | 第53-59页 |
| 3.4.1 14-3-3γ 抑制对相关蛋白的影响 | 第53-57页 |
| 3.4.2 14-3-3γ 抑制对细胞增殖的影响 | 第57-59页 |
| 3.5 14-3-3γ 的互作蛋白分析 | 第59-82页 |
| 3.5.1 免疫共沉淀分析 14-3-3γ 的互作蛋白 | 第59-61页 |
| 3.5.2 14-3-3γ 与eIF1AX、RPS7和eIF5的共定位分析 | 第61-62页 |
| 3.5.3 FRET验证 14-3-3γ 的相互作用蛋白 | 第62-67页 |
| 3.5.4 WB检测添加Met对相关蛋白表达的影响 | 第67-68页 |
| 3.5.5 IF检测添加Met对互作蛋白表达的影响 | 第68-70页 |
| 3.5.6 14-3-3γ 过表达后对相关蛋白的影响 | 第70-73页 |
| 3.5.7 14-3-3γ 抑制后对相关蛋白的影响 | 第73-76页 |
| 3.5.8 互作蛋白过表达后对相关蛋白的影响 | 第76-82页 |
| 3.6 14-3-3γ 调节乳蛋白合成和细胞增殖的机理 | 第82-83页 |
| 4 讨论 | 第83-87页 |
| 4.1 蛋氨酸对 14-3-3γ 表达的影响 | 第83页 |
| 4.2 14-3-3γ 对泌乳信号通路的影响 | 第83页 |
| 4.3 14-3-3γ 与eIF1AX、RPS7和eIF5相互作用 | 第83-87页 |
| 4.3.1 eIF1AX的功能简介 | 第84页 |
| 4.3.2 RPS7的功能简介 | 第84-85页 |
| 4.3.3 eIF5的功能简介 | 第85页 |
| 4.3.4 14-3-3γ 通过互作蛋白调节乳蛋白合成 | 第85-86页 |
| 4.3.5 14-3-3γ 通过互作蛋白调节细胞增殖 | 第86-87页 |
| 5 结论 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-100页 |
| 附录 | 第100-107页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第107页 |
