| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第10-12页 |
| 2 材料与方法 | 第12-28页 |
| 2.1 超表达GmNHX1 拟南芥T_3代纯合体的筛选 | 第12-14页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第12页 |
| 2.1.2 酶和试剂 | 第12页 |
| 2.1.3 转基因拟南芥Southern Blotting杂交检测 | 第12-14页 |
| 2.2 超表达GmNHX1 拟南芥基因表达的RT-PCR分析 | 第14-16页 |
| 2.2.1 植物材料的培养和取样 | 第14页 |
| 2.2.2 总RNA的提取 | 第14-15页 |
| 2.2.3 反转录 | 第15页 |
| 2.2.4 引物设计 | 第15页 |
| 2.2.5 RT-PCR反应体系及程序 | 第15-16页 |
| 2.3 超表达GmNHX1 拟南芥耐盐性鉴定 | 第16-17页 |
| 2.3.1 萌发期表型鉴定 | 第16页 |
| 2.3.2 萌发后生长期表型鉴定 | 第16页 |
| 2.3.3 成苗期表型鉴定 | 第16-17页 |
| 2.4 GmNHX1 酵母表达载体的构建及耐盐性的鉴定 | 第17-21页 |
| 2.4.1 所用载体和菌株 | 第17页 |
| 2.4.2 主要酶和试剂 | 第17页 |
| 2.4.3 常用培养基的配置 | 第17页 |
| 2.4.4 GmNHX1 酵母表达载体的构建 | 第17-21页 |
| 2.4.5 转基因酵母的耐盐性检测 | 第21页 |
| 2.5 GmNHX1-GFP亚细胞定位载体的构建及荧光观察 | 第21-22页 |
| 2.5.1 所用载体、试剂和引物 | 第21页 |
| 2.5.2 GmNHX1-GFP亚细胞定位载体的构建 | 第21页 |
| 2.5.3 基因枪法转化洋葱内表皮细胞及荧光观察 | 第21-22页 |
| 2.6 GmNHX1 耐盐机制的分析 | 第22-25页 |
| 2.6.1 拟南芥不同组织Na~+/K~+含量测定 | 第22-23页 |
| 2.6.2 NMT（非损伤微测技术）测定Na~+/K~+流速 | 第23页 |
| 2.6.3 胞内pH的测定 | 第23-24页 |
| 2.6.4 相关耐盐基因表达模式分析 | 第24-25页 |
| 2.7 农杆菌介导的GmNHX1 大豆子叶节遗传转化 | 第25-28页 |
| 2.7.1 植物材料、农杆菌菌株、质粒 | 第25-26页 |
| 2.7.2 转化流程 | 第26-27页 |
| 2.7.3 超表达GmNHX1 阳性植株的检测 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-46页 |
| 3.1 超表达GmNHX1 拟南芥T_3代纯合体的筛选 | 第28-29页 |
| 3.1.1 转基因拟南芥Southern Blotting杂交检测 | 第28页 |
| 3.1.2 超表达GmNHX1 拟南芥基因表达的RT-PCR分析 | 第28-29页 |
| 3.2 超表达GmNHX1 拟南芥耐盐性鉴定 | 第29-33页 |
| 3.2.1 萌发期表型鉴定 | 第29-30页 |
| 3.2.2 萌发后生长期表型鉴定 | 第30-32页 |
| 3.2.3 成苗期表型鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3 GmNHX1 酵母表达载体的构建及耐盐性鉴定 | 第33-37页 |
| 3.3.1 GmNHX1 酵母表达载体的构建及酵母转化 | 第33-34页 |
| 3.3.2 大豆GmNHX1 功能互补试验 | 第34-37页 |
| 3.4 GmNHX1-GFP亚细胞定位载体的构建及荧光观察 | 第37-38页 |
| 3.4.1 GmNHX1-GFP亚细胞定位载体的构建 | 第37页 |
| 3.4.2 GmNHX1-GFP亚细胞定位荧光观察 | 第37-38页 |
| 3.6 GmNHX1 耐盐机制的分析 | 第38-43页 |
| 3.6.1 拟南芥不同组织Na~+/K~+含量测定 | 第38-39页 |
| 3.6.2 根中K~+、Na~+流速变化 | 第39-40页 |
| 3.6.3 胞内pH检测 | 第40-42页 |
| 3.6.4 相关耐盐基因表达模式分析 | 第42-43页 |
| 3.7 农杆菌介导的GmNHX1 大豆子叶节遗传转化 | 第43-46页 |
| 3.7.1 GmNHX1 基因大豆子叶节遗传转化 | 第43-44页 |
| 3.7.2 T_0代抗性芽的检测 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 4.1 大豆GmNHX1 属于液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因 | 第46页 |
| 4.2 大豆GmNHX1 基因能够提高植物的耐盐性 | 第46-47页 |
| 4.3 大豆GmNHX1 基因能够维持胞内相对稳定的酸度环境 | 第47页 |
| 4.4 大豆GmNHX1 基因在整个耐盐调控网络中的作用 | 第47-48页 |
| 5 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-53页 |
| 在读期间已发表论文 | 第53-54页 |
| 作者简介 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
