| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-45页 |
| 1.1 高等植物转录因子结构研究进展 | 第13-23页 |
| 1.1.1 ARF蛋白家族 | 第13-16页 |
| 1.1.2 GRAS蛋白家族 | 第16-17页 |
| 1.1.3 NAC蛋白家族 | 第17-18页 |
| 1.1.4 SBP蛋白家族 | 第18-19页 |
| 1.1.5 WRKY蛋白家族 | 第19-20页 |
| 1.1.6 B3蛋白超家族 | 第20-21页 |
| 1.1.7 AP2/ERF蛋白家族 | 第21-23页 |
| 1.2 LBD蛋白家族研究进展 | 第23-32页 |
| 1.2.1 LOB结构域的特征 | 第23页 |
| 1.2.2 LBD蛋白家族的分类 | 第23-24页 |
| 1.2.3 LBD Motif的研究进展 | 第24-25页 |
| 1.2.4 LBD家族蛋白功能研究 | 第25-32页 |
| 1.3 蛋白结构研究技术 | 第32-44页 |
| 1.3.1 晶体X-射线衍射技术 | 第32-39页 |
| 1.3.2 核磁共振技术 | 第39-41页 |
| 1.3.3 冷冻电镜技术 | 第41-44页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第44-45页 |
| 第二章 实验材料、设备及方法 | 第45-65页 |
| 2.1 实验材料 | 第45-46页 |
| 2.1.1 质粒载体和菌株 | 第45页 |
| 2.1.2 实验所用的酶和试剂 | 第45-46页 |
| 2.1.3 抗生素和培养基 | 第46页 |
| 2.2 实验所需仪器设备 | 第46-47页 |
| 2.2.1 常规实验仪器 | 第46页 |
| 2.2.2 蛋白纯化实验仪器 | 第46-47页 |
| 2.2.3 蛋白结晶实验及后续生化实验所需仪器 | 第47页 |
| 2.3 实验方法 | 第47-65页 |
| 2.3.1 TtRa2 LD及其突变体的表达载体构建 | 第47-50页 |
| 2.3.2 重组TtRa2 LD及其突变体的诱导表达及纯化 | 第50-53页 |
| 2.3.3 LBD ds DNA的退火及纯化 | 第53-54页 |
| 2.3.4 TtRa2 LD及其突变体的圆二色谱测定 | 第54-55页 |
| 2.3.5 动态光散射和分子排阻色谱检测TtRa2 LD | 第55-56页 |
| 2.3.6 蛋白结晶条件筛选及晶体生长优化 | 第56-59页 |
| 2.3.7 双分子荧光互补实验 | 第59-61页 |
| 2.3.8 电泳迁移率变动实验 | 第61-63页 |
| 2.3.9 基于荧光各向异性的DNA结合实验 | 第63-65页 |
| 第三章 实验结果和分析 | 第65-111页 |
| 3.1 TtRa2 LD的表达载体构建、纯化及其基本性质测定 | 第65-74页 |
| 3.1.1 TtRa2 LD的表达载体构建 | 第65-67页 |
| 3.1.2 TtRa2 LD的诱导表达及纯化 | 第67-71页 |
| 3.1.3 TtRa2 LD的基本性质测定 | 第71-74页 |
| 3.2 TtRa2 LD结晶条件初筛、晶体生长优化及结构解析 | 第74-78页 |
| 3.2.1 TtRa2 LD结晶条件初筛 | 第74-75页 |
| 3.2.2 TtRa2 LD晶体生长优化 | 第75-76页 |
| 3.2.3 TtRa2 LD晶体的衍射数据收集及结构解析 | 第76-78页 |
| 3.3 TtRa2 LD的三维折叠结构 | 第78-82页 |
| 3.3.1 TtRa2 LD的整体折叠结构分析 | 第78-80页 |
| 3.3.2 LBD家族蛋白的系统进化分析 | 第80-82页 |
| 3.4 Zinc finger模体的结构特征 | 第82-86页 |
| 3.4.1 锌指模体的内在结构特征 | 第82-84页 |
| 3.4.2 锌指模体中Zn2+和硫醇基的标定及EDTA对其DNA结合活性影响 | 第84-86页 |
| 3.5 GAS模体、α4 以及DPVYG模体参与稳定TtRa2 LD折叠结构 | 第86-89页 |
| 3.5.1 高度保守的Gly64参与维持GAS模体特定的折叠构象 | 第86-87页 |
| 3.5.2 α4 参与稳定TtRa2 LD二聚体 | 第87-88页 |
| 3.5.3 保守的DPVYG模体 | 第88-89页 |
| 3.6 TtRa2 LD同源二聚化及其对TtRa2 LD的DNA结合活性的影响 | 第89-98页 |
| 3.6.1 TtRa2 LD同源二聚化的结构基础 | 第89-91页 |
| 3.6.2 TtRa2 LD同源二聚化的验证 | 第91-94页 |
| 3.6.3 TtRa2 LD二聚化对其DNA结合活性影响 | 第94-98页 |
| 3.7 TtRa2 LD-DNA复合物docking模型及TtRa2 LD和DNA互作分子机制 | 第98-104页 |
| 3.7.1 TtRa2 LD的表面电势分析 | 第98-99页 |
| 3.7.2 TtRa2 LD-DNA复合物的docking模型 | 第99-102页 |
| 3.7.3 TtRa2 LD和DNA互作的分子机制 | 第102-103页 |
| 3.7.4 SDS-PAGE及圆二色谱检测TtRa2 LD及其突变体 | 第103-104页 |
| 3.8 TtRa2 LD-LBD dsDNA复合物的组装及共结晶实验 | 第104-111页 |
| 3.8.1 LBD ds DNA的退火及纯化 | 第104-106页 |
| 3.8.2 TtRa2 LD与LBD dsDNA复合物组装、共结晶条件筛选及优化 | 第106-111页 |
| 第四章 讨论和总结 | 第111-115页 |
| 4.1 讨论 | 第111-113页 |
| 4.1.1 TtRa2 LD二聚体中两个zinc finger相对位置的确定 | 第111页 |
| 4.1.2 导致植物遗传表型变异的LBD蛋白关键氨基酸位点的突变 | 第111-112页 |
| 4.1.3 LBD蛋白识别LBD motif的分子机制 | 第112-113页 |
| 4.2 总结 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-132页 |
| 附录 | 第132-138页 |
| 缩略词 | 第138-139页 |
| 致谢 | 第139-140页 |
| 作者简介 | 第140页 |
