| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 英文缩略表 | 第10-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-29页 |
| 1.1 家蚕类胰岛素的研究进展 | 第16-23页 |
| 1.1.1 家蚕类胰岛素的发现与命名 | 第16页 |
| 1.1.2 家蚕素基因的分类 | 第16-17页 |
| 1.1.3 家蚕素的基因结构分析 | 第17页 |
| 1.1.4 家蚕素的蛋白结构分析 | 第17-18页 |
| 1.1.5 家蚕素家族成员的组织表达分布 | 第18-19页 |
| 1.1.6 家蚕素家族成员的生理学功能 | 第19-20页 |
| 1.1.7 家蚕类胰岛素生长因子研究进展 | 第20-21页 |
| 1.1.8 家蚕类胰岛素受体蛋白研究进展 | 第21页 |
| 1.1.9 家蚕素信号通路 | 第21-23页 |
| 1.2 其它昆虫的类胰岛素的研究进展 | 第23-26页 |
| 1.2.1 鳞翅目昆虫果蝇类胰岛素的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.2.2 双翅目昆虫蚊子类胰岛素的研究进展 | 第24-26页 |
| 1.2.3 膜翅目昆虫蜜蜂类胰岛素的研究进展 | 第26页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 1.4 主要的研究内容 | 第27-28页 |
| 1.5 研究的技术路线 | 第28-29页 |
| 第二章 BmILP基因的生物信息学分析 | 第29-39页 |
| 2.1 方法 | 第29-30页 |
| 2.1.1 序列来源 | 第29页 |
| 2.1.2 序列处理 | 第29-30页 |
| 2.2 结果与分析 | 第30-37页 |
| 2.2.1 BmILP基因的染色体定位与信号肽预测 | 第30页 |
| 2.2.2 BmILP序列与基因结构分析 | 第30-32页 |
| 2.2.3 BmILP与家蚕素家族的氨基酸相似性分析 | 第32-33页 |
| 2.2.4 BmILP与家蚕素家族的氨基酸保守性分析、进化树构建及基序预测 | 第33-36页 |
| 2.2.5 全长和去信号肽BmILP基因的mRNA次级结构的分析 | 第36-37页 |
| 2.3 讨论与小结 | 第37-39页 |
| 第三章 BmILP基因的分子克隆鉴定和时相分析 | 第39-51页 |
| 3.1 材料试剂 | 第39-41页 |
| 3.1.1 菌株和质粒 | 第39页 |
| 3.1.2 材料和试剂 | 第39页 |
| 3.1.3 试剂的配制 | 第39-40页 |
| 3.1.4 设备和仪器 | 第40-41页 |
| 3.2 方法 | 第41-46页 |
| 3.2.1 总RNA的抽提和cDNA的合成 | 第41-42页 |
| 3.2.2 BmILP基因的引物设计和PCR片段克隆 | 第42-43页 |
| 3.2.3 PCR产物的回收与酶连 | 第43页 |
| 3.2.4 TG1大肠杆菌的感受态制备 | 第43-44页 |
| 3.2.5 转化 | 第44页 |
| 3.2.6 重组质粒的抽提与酶切及测序鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.7 荧光定量PCR | 第45-46页 |
| 3.3 结果和分析 | 第46-49页 |
| 3.3.1 BmILP全长和去信号肽基因的克隆和鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.2 BmILP基因在家蚕不同发育阶段的转录时相分析 | 第47-48页 |
| 3.3.3 BmILP基因在家蚕不同组织的转录时相分析 | 第48-49页 |
| 3.4 讨论和小结 | 第49-51页 |
| 第四章 家蚕BmILP的原核表达与多克隆抗体制备 | 第51-64页 |
| 4.1 材料试剂 | 第51-53页 |
| 4.1.1 材料 | 第51页 |
| 4.1.2 试剂 | 第51页 |
| 4.1.3 配置的试剂 | 第51-52页 |
| 4.1.4 仪器设备 | 第52-53页 |
| 4.2 方法 | 第53-57页 |
| 4.2.1 全长和去信号肽BmILP基因的原核表达载体的构建 | 第53页 |
| 4.2.2 重组质粒在大肠杆菌中的表达 | 第53-54页 |
| 4.2.3 SDS-PAGE分析 | 第54页 |
| 4.2.4 Western blotting | 第54-55页 |
| 4.2.5 包涵体蛋白纯化 | 第55-56页 |
| 4.2.6 一维胶内酶解 | 第56页 |
| 4.2.7 BCA法测定蛋白浓度 | 第56-57页 |
| 4.2.8 抗血清的制备和纯化 | 第57页 |
| 4.3 结果分析 | 第57-63页 |
| 4.3.1 全长和去信号肽BmILP基因的重组质粒的鉴定 | 第57-58页 |
| 4.3.2 信号肽对BmILP基因表达的影响 | 第58-59页 |
| 4.3.3 融合蛋白的纯化和质谱鉴定 | 第59-61页 |
| 4.3.4 纯化的融合蛋白的浓度测定 | 第61-62页 |
| 4.3.5 抗体的验证 | 第62-63页 |
| 4.4 讨论小结 | 第63-64页 |
| 第五章 家蚕BmILP互作蛋白的研究 | 第64-70页 |
| 5.1 材料和试剂 | 第64-65页 |
| 5.1.1 材料 | 第64页 |
| 5.1.2 试剂 | 第64页 |
| 5.1.3 试剂配制 | 第64-65页 |
| 5.2 方法 | 第65-66页 |
| 5.2.1 包涵体蛋白的透析复性 | 第65页 |
| 5.2.2 真核蛋白的抽提 | 第65页 |
| 5.2.3 His-pull down | 第65-66页 |
| 5.2.4 免疫沉淀 | 第66页 |
| 5.3 结果与分析 | 第66-69页 |
| 5.3.1 His-tag pull down实验与质谱鉴定 | 第66-68页 |
| 5.3.2 免疫沉淀（IP）与质谱鉴定 | 第68-69页 |
| 5.4 讨论与小结 | 第69-70页 |
| 第六章 家蚕BmILP基因的RNA干扰 | 第70-77页 |
| 6.1 材料和试剂 | 第70-71页 |
| 6.1.1 材料 | 第70页 |
| 6.1.2 试剂 | 第70页 |
| 6.1.3 仪器设备 | 第70-71页 |
| 6.2 方法 | 第71-72页 |
| 6.2.1 siRNA注射家蚕 | 第71页 |
| 6.2.2 RNA干扰效果检测 | 第71页 |
| 6.2.3 家蚕血淋巴总糖的测定和葡萄糖标准曲线的绘制 | 第71-72页 |
| 6.3 结果分析 | 第72-75页 |
| 6.3.1 RNA干扰结果的检测 | 第72-73页 |
| 6.3.2 葡萄糖标准曲线绘制和家蚕血淋巴总糖的变化 | 第73-74页 |
| 6.3.3 家蚕体重的变化 | 第74-75页 |
| 6.4 讨论与小结 | 第75-77页 |
| 第七章 总结与展望 | 第77-79页 |
| 7.1 主要工作总结 | 第77-78页 |
| 7.2 工作展望 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 在校期间发表论文与主持项目 | 第89页 |
| 参与科研项目 | 第89页 |
